5.3血红蛋白的提取和分离总结.pptVIP

二、实验操作 蛋白质的提取和分离步骤： 1、样品处理： 2、粗分离： 3、纯化： 4、纯度鉴定： 透析过程 * * * * 专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离 1.凝胶色谱法 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢； 大分子通过多孔凝胶颗粒的外部，路程短，流动快。 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子向下差速流动。 混合物 上 柱 洗 脱 大分子流动快 小分子流动慢 收 集 大分子 收 集 小分子 例题1 2.缓冲溶液－－洗脱剂 5.3% 94.7% 8.0 39% 61% 7.0 87.7% 12.3% 6.0 0.2mol/L NaH2PO4 0.2mol/L Na2HPO4 pH 调节缓冲剂的使用比例就可制出不同pH范围内使用的缓冲液 3．电泳： 影响蛋白质分子运动速度的因素 ? 运动方向 电场力 阻力 运动速率 电荷性质 电荷量 分子形状 分子大小 √ √ √ √ √ √ √ SDS所带电荷量远大于蛋白质所带电荷量，因而掩盖了不同蛋白质的电荷差别，使电泳速度取决于分子大小。 基础训练 1、2 琼脂糖凝胶电泳 训练1 ③分离血红蛋白溶液。 ②血红蛋白释放； ①洗涤红细胞； 透析。 凝胶色谱法。 通过