专题5_课题3_血红蛋白的提取和分离(gkk)汇总.ppt

采集得到鸡血 教学反馈 1．凝胶色谱法是根据（ ）分离蛋白质的有效方法。 A分子的大小 B相对分子质量的大小 C带电荷的多少 D溶解度 2．缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（ ）基本不变。 A温度 B pH C渗透压 D氧气浓度 3．电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（ ）的电极移动。 A相同 B相反 C相对 D相向 4. 哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（ ）与氧气的运输有关。 A血红蛋白 B肌红蛋白 C肌动蛋白 D肌球蛋白 装配好的凝胶柱 ⑶.样品加入与洗脱 ①调节缓冲液面 ②滴加透析样品 注意：正确的加样操作是： 1.不要触及并破坏凝胶面。 2.贴壁加样。 3.使吸管管口沿管壁环绕移动。 ③样品渗入凝胶床 ④洗脱 ⑤收集 注意：在分离过程中，如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功。 3.样品的加入和洗脱 开始进行层析 收集得到的纯化后的蛋白 思考下面的问题： 1、在血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？ 答：让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持结构和功能。 2、与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质得分离有什么意义？ 答：血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。 B B B A 导入：介绍当前有关蛋白质研究的新进展，激发学习兴趣。 课题背景的引入。 各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫做全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小不同，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的分离范围。 专题5 课题3 体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。 1、主要概念：①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液 ④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。 2、主要原理：①凝胶色谱法分离蛋白质的原理 ②电泳法分离样品的原理 ③缓冲溶液的组成和作用机理 3、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法 4、课题难点：①样品的预处理 ②色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 本课题学习目标 水 分 固体物质 血液 血浆 血细 胞 白细胞 血小板 红细胞 （最多） 血红蛋白 两个α—肽链 两个β—肽链 四个亚铁红素基团 思考与讨论 血液有哪些成分？ 血浆蛋白 无机盐 磷脂 葡萄糖等 血红蛋白的特点： 血红蛋白 两个α—肽链 两个β—肽链 四个亚铁红素基团 1.分离生物大分子的基本思路： 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 2.蛋白质分离和提取的原理： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 ㈠.血红蛋白的提取和分离 一、基础知识 一、基础知识--蛋白质提取和分离原理 蛋白质提取与分离的依据－－蛋白质的物理化学性质： 形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、 亲和力等千差万别。 提取分离方法 凝胶色谱法 凝胶电泳法 ㈡.缓冲溶液 1.概念: 在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液pH值基本保持不变的混合溶液。 2.缓冲溶液的组成举例： ⑴.弱酸及其对应的盐: H2CO3 —— NaHCO3、CH3COOH —— CH3COONa ⑵.弱碱及其对应的盐: NH3。H2O —— NH4Cl ⑶.多元弱酸的酸式盐和其他所对应的次级盐: NaH2PO4 —— Na2HPO4、KH2PO4 —— K2HPO4 3.缓冲溶液的配制 ㈢.分离蛋白质的方法 根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。 大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。 ⑴.概念： 1.凝胶色谱法（分配色谱法） ⑵.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程 ⑶.凝胶色谱法的原理—分子筛效应： 当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速