天麻素诱导脐血间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验解释.pptVIP

一、选题目的、思路和意义 干细胞移植是国际国内研究的热点问题，临床应用具有很大前景。 神经系统退行性疾病发病率逐年增加，临床难治，神经干细胞的应用为此类疾病的 治疗带来新的希望。 脐血间充质干细胞分化能力强，原材料-脐血采集方便，应用不受伦理、法律限制。 二、研究进展 研究证明多种抗氧化中药具有诱导间充质干细胞向神经干细胞分化的作用。 天麻素具有抗氧化作用，安全、毒副作用小，有望成为新一代的干细胞分化诱导剂。 二、立题依据 中医理论依据 现代医学理论依据 （一）中医理论依据 天麻药性甘，平，归肝经。功能息风止痉，平抑肝阳，祛风通络。 神经干细胞存在于大脑中，中医属于“脑髓”。 肾主髓，天麻归肝经，肝肾同源，天麻可以通过滋肝阴，以补肾阴，达到滋补脑髓的作用。 二 现代医学理论研究 1、天麻素 现代研究证明天麻的主要有效成分（天麻素）具有抗氧化、保护受损脑细胞、抗衰老等作用。 2、脐血间充质干细胞的鉴定 脐血间充质干细胞（UBMSCs）表面标志抗原主要包括SH2、SH3、CD29、CD71、CD90、CDl05、CDl20a、CDl24、CD105、CDl66等，而CD34、CD45、CDl4、CDllb、CDl33等造血细胞表面标志为阴性。 本实验中采用流式细胞仪CD45、CD29、CD54、CD33、CD105、CD166,从而对脐血对分离扩增后的脐血间充质干细胞进行鉴定。 3、神经干细胞的鉴定 巢蛋白（Nestin）是目前鉴定神经干细胞应用最广泛的一种标志物，它是中间丝蛋白的一种，存在于干细胞、反应性星形细胞中。 神经元特异性烯醇化酶（NSE）为烯醇化酶的同工酶，特异性地存在于神经元中，是神经干细胞成熟的标志。 胶质纤维酸性蛋白 GFAP 为星形胶质细胞特异性产生的蛋白。 四、实验设计方案和技术路线 附表：分组 按照诱导剂的不同分为4组 A组不添加诱导剂； B组加入天麻素20μl/L； C组添加以含30μmol/L全反式维甲酸 RA 、成纤维生长因子 bFGF 10ug/L的培养液诱导； D组添加天麻素20μmol/L、RA30μmol、10ug/LbFGF。 附表：实验评估 1）形态学观察：倒置显微镜下，动态观察诱导前后UBMSCs形态学变化。 2）免疫组化方法检测：巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白 统计处理 五、创新之处 将中医药与现代前沿研究结合； 着眼于解决西药诱导剂毒副作用大的临床实际问题； 为UBMSCs的诱导分化提供新的材料来源。 六、工作的进度安排 1、2012.03-2012.05 文献检索，撰写综述和开题报告 2、2012.05 开题论证 3、2012.06-2012.07 实验准备阶段，预实验 4、2012.07-2013.01 完成细胞实验，各项指标检测 5、2013.02-2012.03 实验数据处理，资料整理，论文撰写 6、2013.04 论文送审 7、2013.05 论文答辩 七、毕业论文设计 神内一科 研究生导师 金萍 向光红 教授 * * * 论 文 开 06 级 七 年 制 金萍 萍 题 06级七年制硕士研究生开题论证 研 究 生：金萍 导 师：向光红 教授 专 业：中医内科学 研究方向：神经内科 目录 一、选题的目的、思路和意义 二、研究进展及发展趋势 三、立题依据 四、实验设计方案和技术路线 五、创新之处 六、工作的进度计划 七、毕业论文设计 人体干细胞分为成体干细胞和胚胎干细胞；间充质干细胞是成体干细胞的一种； 干细胞分化诱导方法 细胞因子法 bFGF、RA 抗氧化法（2-硫基乙醇、二甲亚砜） 脐血10份 ↓ 脐血间充质干细胞分离、培养、扩增 ↓ 脐血间充质干细胞鉴定 ↙ ↙ ↘ ↘ A组 B组 C组 D组 ↓ 培养14d ↓ 试验评估 ↙ ↓ ↘ 形态学 免疫组化 流式细胞仪 观察 鉴定 检测表面标志物 ↓ 收集数据，统计分析 ↓ 研究报告 实验数据建立EXCEL数据库 采用SPSSl6.0统计软件分析。 （一）标题 （二）目录 （三）中英文摘要 （四）实验研究与方法 （五）结果与分析 （六）讨论 （七）结语 （八）鸣谢 （九）参考文献 （十）附录 神内一科 研究生导师 金萍 向光红 教授 * * 论 文 开 06 级 七 年 制 金萍 萍 题 * *