第二章染色体与DNA2资料.ppt

第三节 DNA的复制 DNA的复制与细胞分裂之间存在密切关系。DNA的复制起始保证了细胞进一步分裂，复制完成才能引发细胞分裂，细胞分裂结束才能开始新一轮DNA复制。 DNA的复制（replication）是指以原来的DNA分子为模板合成出相同的DNA分子的过程。 DNA的复制概况 一、DNA的半保留复制 1、概念： DNA复制时每个子代DNA分子的一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式称半保留复制（semiconservative replication ）。 Distinguishing between Models of DNA Replication 基于DNA双螺旋结构，曾出现有三种不同复制模式的假说： Semi-conservative replication Conservative replication Dispersive replication 实验依据: 1958年，Meselson和Stahl用15N同位素标记和CsCl密度梯度离心法。 半保留复制是双链DNA普遍采用的复制机制。 意义：半保留复制说明DNA在代谢上的稳定性。 二、DNA复制的起点、方向和方式 基因组能独立进行复制的单位称为复制子（replicon） 每个复制子都含有控制复制起始的起点（origin） 可能还有终止复制的终点（terminus） 复制正在发生的位点叫做复制叉（replication fork）或生长点（growing point）。 DNA复制的方向 复制可单向进行，也可以双向进行，这取决于在起点有一个还是两个复制叉。 DNA复制的方式 大多数生物体内DNA的复制都以双向等速方式进行。但枯草杆菌两个复制叉的移动是不对称的。质粒ColEⅠ的复制完全是单向进行的。 大多数生物体内的DNA复制都以对称方式进行，即DNA分子的两条链同时复制。但也有在一定时期内DNA只复制一条链的情况。例如线粒体的D－环复制和一些细菌噬菌体的滚环复制方式。 环形DNA双链的复制方式 θ型： 滚环型：噬菌体 D－环型：线粒体 滚环和D-环的存在表明，可以只以一条链为模板起始DNA的合成。 Requirements Enzyme: DNA Polymerase DNA Template 3’ OH (primer of DNA or RNA) Deoxynucleoside triphosphates: dATP, dGTP, dCTP, dTTP Synthesis is 5’ to 3’ 三、DNA聚合酶与DNA聚合反应 DNA的复制是以DNA为模板，在DNA聚合酶（DNA polymerase）催化下进行的DNA合成反应。 原核细胞 DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 真核细胞 DNA聚合酶α、β、γ、δ、ε DNA聚合酶性质： 以四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）为底物催化 合成DNA； 反应需要模板的指导； 不能起始合成新的DNA链，需要引物存在； 催化DNA合成的方向是5‘－3’； 产物的性质与模板相同。 在适量DNA和镁离子存在下，DNA聚合酶催化4种脱氧核糖核苷酸合成DNA，每次在DNA的3’-OH末端加入一个核苷酸使DNA链由5’向3’方向延长，同时释放无机焦磷酸。 大肠杆菌DNA聚合酶 聚合酶 Ⅰ 亚基数目 1 5，→3，聚合酶活性 5，→3，外切酶活性 3，→5，外切酶活性 用蛋白水解酶将DNA聚合酶Ⅰ作有限水解，可得到分子量为68 KD和36 KD的两个片段。 大片段（68KD，也叫Klenow片段） Klenow片段具有聚合酶活性和3’→5’外切核酸酶活性。 小片段（35 KD） 有5’→3’外切核酸酶活性。 切除由紫外线照射而形成的嘧啶二聚体； 5’端RNA引物的切除。 DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅱ的活性很低，只有DNA聚合酶Ⅰ的5％。 DNA聚合酶Ⅱ 具有5’ - 3’聚合酶活性、3’-5’外切核酸酶活性，但无5’-3’外切酶活性。 DNA聚合酶Ⅱ在DNA的修复中起一定作用。 DNA聚合酶Ⅲ DNA聚合酶Ⅲ是真正负责大肠杆菌细胞内合成DNA的复制酶。 DNA聚合酶Ⅲ是多亚基组成的蛋白质。DNA聚合酶Ⅲ全酶由α、β、γ、δ、ε、θ、和τ 10种不同的亚基组成。α、ε、