多糖滴定半微量法.docVIP

多糖滴定法-夏费·索姆吉法 1 实验材料 1.1 仪器 分析天平 滴定管 水浴锅 刻度吸管 电热鼓风干燥箱 1.2 样品 枸杞多糖 1.3 试剂1mol·L-1H2SO4溶液5g·L-1酚酞指示剂称取酚酞指示剂0.5g，溶于100mL的900mL·L-1乙醇溶液中夏费—索姆吉试剂称取无水Na2CO3(分析纯)25.0g和酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O，分析纯)25.0g放入2L烧杯中，加水约500mL使其溶解。将一漏斗的颈端插入液面以下，在不断搅拌下，通过漏斗加100g·L-1CuSO4·5H2O溶液75mL。再加入NaHCO3(分析纯)20g，溶解后再加入KI(化学纯)5g，转入1L容量瓶中，加入0.0167mol·L-1KIO3溶液(KIO3，3.568g·L-1)250mL，用水定容。用砂芯坩锅过滤，放置过夜备用。KI—草酸盐溶液称取KI(化学纯)2.5g和2C2O4(化学纯)2.g溶于水中，并稀释至100mL，每周现用现配。0.005mol·L-1Na2S2O3标准溶液先配制0.1mol·L-1Na2S2O3溶液，称取Na2S2O3·5H2O(分析纯)25.0g溶于1L煮沸后已冷却的水中，加入Na2CO30.1g，盛于棕色瓶中，贮放在低温暗处。此为0.1mol·L-1 Na2S2O3贮备液，一天后进行标定。0.005mol·L-1 Na2S2O3标准溶液不稳定，须在使用当天用煮沸的冷水准确稀释贮备液至恰为0.005mol·L-1。 0.1mol·L-1 Na2S2O3溶液的标定：称取已在100℃烘干2h K2Cr2O7(分析纯)0.20××g，放在250mL三角瓶中，溶于含有KI 2g的80mL水中，边搅边加入1mol·L-1，在暗处放置5min后，用0.1mol·L-1 Na2S2O3溶液滴定。当溶液由橙红色变为浅黄绿色时，加入淀粉指示剂10滴，继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色(Cr3+的颜色)为止。计算Na2S2O3贮备溶液的准确浓度。10g·L-1淀粉指示剂 称取可溶性淀粉1.0g和HgI2(防腐剂)5mg，用少量水调研，溶于100mL沸水，冷却后使用 葡萄糖酶 无水乙醇 2 实验内容 2.1 多糖的提取 称取样品约2.0g，置于100ml量瓶中，加入80ml左右的水，于沸水浴中加热1h，冷却至室温后加水至刻度，混匀，以4000r/min离心5min。取50ml上清于100ml量瓶中，加入淀粉酶液0.1ml和0.5ml0.2M磷酸盐缓冲液，加塞，至55℃水浴中酶解1h，再加5mg葡萄糖酶，于55℃水浴中酶解1h，碘检。煮沸，冷却，定容。取20.0ml于离心管中，加入无水乙醇80ml，混匀，以4000r/min离心5min，弃去上清，残渣用80%（V/V）乙醇溶液10ml洗涤，离心，弃去上清。重复洗涤两次。 2.2 多糖的水解 用30ml热水，将沉淀溶解并转移至酸水解瓶，加入10ml浓盐酸，在沸水浴中回流2h，冷却。然后用40%的氢氧化钠粗调，再用稀的氢氧化钠微调至pH在6.8～7.2之间。将中和的酸解液转移至50ml量瓶中，加水定容，加活性炭0.5g，混匀，静置3min，以4000r/min离心5min。 2.3 还原糖的测定吸取mL上清于具塞三角瓶中，加索姆吉试剂5mL，摇动混匀。同时作空白试验。在，小心将试管平稳地置于流动冷水浴中4min；去盖，沿管壁加入KI—K2C2O4 2mL(溶液为碱性时不要摇动)及1mol·L-1 H2SO4 3mL，充分摇动混匀，使Cu2O完全溶解；再于冷水浴中放5min，并摇动2次。然后用0.005mol·L-1 Na2S2O3溶液滴定，至浅黄色时，加入淀粉为指示剂5—10滴，继续滴定至蓝色消失为终点。 另取蒸馏水5mL(代替的待测液)按同样的操作进行空白标定。由空白标定与样品测定所用0.005mol·L-1 Na2S2O3mL数之差，从附录当量表中查得相当的还原糖mg数。用已知量的标准糖溶液同样进行测定，可以校验表的数值。 2.4 计算公式 查表15—4得还原糖mg数××50×100×100×0.9 多糖??(%)=×20×10×50 3 实验结果 根据计算公式计算得三次测定结果如表。 样品 样品的重量（g） 滴定液消耗体积 多糖（mg） RSD 第1份 第2份 第3份 附录 索姆吉法还原糖Na2S2O3相当量表 005mol·L-1 Na2S2O3(mL) 0.005mol·L-1Na2S2O3 1/10mL数 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 5mL糖液中还原糖的mg数 3 0.378 0.389 0.400