第四章茎尖分生组织培养资料.pptVIP

一、概念和意义 1.概念 茎尖分生组织培养：指对不超过0.1mm的茎尖或几十微米的茎尖进行的培养。 特点：可获无病毒苗，操作困难，成苗时间长。 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易成活、成苗时间短、繁殖速度快。 二、茎尖分生组织培养一般方法 1.材料的制备 健壮枝梢 去除叶片 分成1-2cm 自来水冲洗 消毒 75%的酒精30秒 0.1%升汞或20倍次氯酸钠消毒8-10min 无菌水 修剪剥离茎尖，通常切割下顶端0.2~0.5 mm叶原基的茎尖（无菌水） 接种。 2.培养基 多为MS培养基及其改良配方，还有White、B5等。 3.培养条件 （1）温度：26℃~28℃ （2）光照：光培养的效果通常比暗培养好。 （3）湿度：与其他器官培养相似。 三、脱毒的方法 （一）热处理脱毒法 热处理脱毒原理 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一起复制。 热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传染能力。 作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。 热处理法有：温汤处理（热水浸泡）和热风处理两种。 具体方法： 第一，热水浸泡处理，适用于切下的材料，在50度左右的温水中浸渍数分钟至数小时，方法简便易行但材料易受伤。 第二，热风处理，将生长的盆栽植物移入室内或生长箱内，处理温度因植物种类、生理状况而异。一般为35~40度，短则几十分钟，长达数月。 热处理的优缺点 优点: 方法简单，效果明显。 缺点: 1)具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病毒）无效。 2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死，造成损失 3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。 （二）茎尖培养脱毒 1.茎尖培养脱毒的原理 （1）病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。 必须指出的是，所谓无病毒，只是相对的，不是绝对的。 （2）茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要，生长素，细胞分裂素，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。因此茎尖越大培养成活率越高。因此对不同植物脱毒适宜的茎尖大小不同。 2.茎尖培养脱毒的方法 （1）取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。 （2）接种 材料置10～40倍的双筒解剖镜下，解剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶原基的茎尖，接种到培养基上。 （3）培养 接种后材料置25+2℃ ，光照度1500-5000LX，每日光照10-16h条件下培养。但一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。 3.培养基与培养方式 ： （1）培养基：常用MS， White等培养基。 （2）培养方式：茎尖培养一般采用半固体培养基 微体嫁接法 脱除病毒的关键： ①要求剥离技术很高 ②需要考虑砧木和接穗对营养组成的不同要求； ③与接穗的取材季节有密切关系（苹果4~6月取材嫁接成活率较高。） 植物病毒的症状 植物病毒引起植株的症状是各异的，在观赏植物上由病毒引起外部症状主要有以下几种： （1）变色：褪绿、黄化、花叶、斑驳、红叶等，常见病毒有；香石竹斑驳病毒、黄瓜花叶病毒、芋花叶病毒等。 （2）坏死：常见的坏死是病斑或斑点。有轮斑、环斑、条斑‘条纹等。如香石竹坏死斑点病毒、，凤仙花坏死斑点病毒草等。 （3）畸形：植株可出现矮缩、矮化或叶片皱缩、卷叶、蕨叶等病状。 （4）萎蔫 ：主要是指植物根或茎的维管束组织受到破坏而发生供水不足所出现的凋萎现象。 指示植物法 定义:将一些对病毒敏感、症状特征显著的植物作为指示植物(又叫鉴别寄主),利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法. 3、电子显微镜鉴定法 （3）无病毒原种的繁殖 可在无毒源和其他病虫害的大田中进行，场地土壤要进行消毒，防治蚜虫、线虫和其他传毒媒介，并建立一套严格的原种繁育制度和栽培管理制度，防止病毒的再次感染。 四、植物脱毒苗的鉴定 1、视觉观察法 (直接检测法) 看植株的茎叶是否有该病毒所有可见症状。 番