实验七石蜡切片法2教程.ppt

实验八 石蜡切片法 —— 染色、封藏 切片通过不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每一张载片上粘贴的是蜡带，因此必须先用二甲苯去除石蜡再用酒精去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色的方法很多，要根据每张标本要求显示的目的选择不同的染剂，染色后显示清晰的细胞形态和核的大小，位置，然后使带水的载片经历脱水→透明等步骤最后用树胶封片。 实验原理 染色原理－－物理作用 渗透作用：染料渗透到多孔的组织中，与组织没有牢固的结合； 吸收作用：又称溶解学说，组织吸收染料中的色素粒子，与之牢固结合，组织着色与染液的颜色相同，不一定与干燥染料的颜色相同。如品红在干燥时为绿色，而其溶液呈红色，组织在染色后也呈红色，即使组织干燥后，其红颜色不变； 吸附作用：染液中分散的色素粒子进入被染物质的粒子间隙内，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是说对粒子的吸附有选择性，即有的容易被某些物质吸附，有的则不容易吸附。 染色原理－－化学作用 化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子)和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳离子(碱性部分)较牢固地结合。 例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲和力很大，易于着色。 常用染色剂分类 按染料的化学性质可分为 ：碱性染料 、酸性染料 、直接染料 、媒染染料 、中性染料； 根据染料的来源可分为：天然染料（此类染色剂是从动、植物体中提取的，为天然产物，产量少。目前常用的有苏木精、洋红、地衣红和靛蓝等）和合成染料（全是由芳香环或具有芳香性的杂环化合物所构成。最早是由煤焦油蒸馏产物合成而得的，所以又称为煤焦油染料）。 根据染料的用途可分为：细胞核染色剂（用于细胞核的染色剂有天然染色剂的苏木精、洋红以及合成染色剂中的番红、结品紫、硫堇、甲苯胺蓝、甲基绿、美蓝、孔雀绿和焦油紫等）、细胞质染色剂（用于细胞质的染色剂有合成染色剂中的曙红、亮绿、橘黄G、酸性品红、苦味酸和水溶性苯胺蓝等）和脂质染色剂（用于显示脂质的染色剂有合成染色剂中的苏丹III、苏丹Iv、硫酸尼罗蓝及油红等）。 一、实验目的 掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求； 学习和掌握番红-固绿及苏木精-伊红双重染色方法。 二、实验材料及用品 实验材料：上周已切和贴好的植物叶片、小鼠肝脏的切片 实验用具：盖玻片、染色缸、镊子、显微镜。 实验药品：梯度酒精、 ?二甲苯+ ?100%酒精 、二甲苯、苏木精染色液、1%伊红水溶液、1%番红水溶液、1%固绿95%酒精溶液、加拿大树胶。 三、实验步骤（1） 番红-固绿 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ ?二甲苯+ ?100%酒精 100%AL 95%AL 80%AL 70%AL 50%AL 蒸馏水 1%番红水溶液 水洗 50% 80% 70% 95% 1%固绿95%酒精溶液 95% 100% ?二甲苯+ ?100%酒精 二甲苯 树胶封藏 脱蜡 复水 染色 脱水 对染 脱水 透明 封藏 10min 10min 5min 5min 5min 5min 5min 5min 5min 10min 10min 10min 10min 10-60s 洗一下 5min 5min 5min 1.5-2h 三、实验步骤（2） 苏木精-伊红（HE） 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ ?二甲苯+ ?100%AL 100%AL 95%AL 80%AL 70%AL 50%AL 蒸馏水 苏木精染色液 水洗 氨水中“蓝化” 1%伊红水溶液 蒸馏水漂洗 70%AL 80%AL 95%AL 100%AL ?二甲苯+ ?100%AL 二甲苯 树胶封藏 脱蜡 复水 染色 对染 脱水 透明 封藏 10min 10min 5min 5min 5min 5min 5min 5min 5min 3-4s 5min，换几次 3min 过一下 5min 5min 5min 5min 5min 20min 5min，换几次 染色时注意的几个问题 应根据材料的结构、性质、观察目的来选择染色方法 ； 材料从溶液中取出放入染色液时，此两种溶液的浓度必须相同 ； 作二重染色时，应先染碱性染 料，后染酸性染料； 染色宁可深一点，不要浅一点 ； 作分色用的酸、碱溶液必须彻底洗净； 制成的片子不要置于阳光下，以免褪色。 封片注意事项 切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不挥发，如已干，则可再滴加少许二甲苯； 封片时万一树胶量过少，