二甲双胍对高糖介导的成骨细胞MG63增殖和相关基因表达的影响.pdfVIP

二甲双胍对高糖介导的成骨细胞MG63 增殖及相关基因表达的影响 中文摘要 二甲双胍对高糖介导的成骨细胞MG63 增殖及 相关基因表达的影响 中文摘要 随着生活水平的提高，生活方式西方化及人口老龄化，人类健康面临的慢性疾病 威胁正日益加重，其中糖尿病及其慢性并发症更是危害健康的无情杀手。已证实长期 高血糖通过多种方式引起骨代谢紊乱，如糖毒性、高渗性及晚期糖基化终产物 AGEs 等。体外实验也表明，高浓度葡萄糖对成骨细胞的增殖、分化和矿化产生明显的抑制 作用。骨保护素 OPG 、核因子-κB 受体活化因子配体 RANKL 及核因子-κB 受体活 化因子 RANK 是近年来发现的调控破骨细胞分化激活的细胞因子，其在骨代谢中起 重要作用。在骨组织中，成骨细胞及骨髓基质细胞表达RANKL，与破骨细胞前体细 胞或破骨细胞表面上的 RANK 结合后，促进破骨细胞的分化和激活，并抑制破骨细 胞的凋亡。由成骨细胞分泌的OPG 可与RANKL 结合，竞争性抑制RANKL 与RANK 的结合，减少破骨细胞生成，发挥抗骨质疏松的作用。 二甲双胍（metformin,MET ）作为治疗糖尿病的一线药物，其通过激活AMP 激 活蛋白激酶（activated protein kinase, AMPK ）信号系统发挥降糖作用。新的研究表明 二甲双胍能够降低1 型及2 型糖尿病患者骨折的发生率，对骨骼产生有益影响，其具 体机制可能为二甲双胍激活 AMPK 信号通路继而引起内皮型一氧化氮合酶 endothelial nitric oxide sythase, eNOS 和骨形态发生蛋白 bone morphogenetic protein-2, BMP-2 表达增加，影响成骨细胞的增殖、分化和矿化过程，对骨代谢发挥一定保护 作用。本实验中我们观察高糖环境对成骨细胞增殖、分化及矿化标志物、相关基因表 达的影响，以及二甲双胍干预后相应基因表达的变化，进一步探讨在高糖环境中二甲 双胍对成骨细胞代谢的保护作用。 一、葡萄糖对成骨细胞MG63 增殖及相关基因表达的影响 目的 探讨不同浓度葡萄糖对成骨细胞 MG63 增殖的影响及细胞相关基因表达 的变化。 I 中文摘要 二甲双胍对高糖介导的成骨细胞MG63 增殖及相关基因表达的影响 方法 1 以不同浓度葡萄糖 5.5、16.7、33.3、5.5/16.7、5.5/33.3mmol/L 干预细胞 MG63 为干预组，设磷酸缓冲盐溶液 PBS 为对照组，应用细胞增殖和细胞毒性检测 试剂盒 CCK-8 检测细胞增殖； 2 以不同浓度葡萄糖 5.5、16.7、33.3mmol/L 干预细 胞MG63 为干预组，同时设磷酸缓冲盐溶液 PBS 为对照组，应用生化分析仪检测细 胞内碱性磷酸酶 ALP 的含量； 3 以不同浓度葡萄糖 5.5、16.7、33.3mmol/L 干预细 胞MG63 为干预组，同时设磷酸缓冲盐溶液 PBS 为对照组，应用RT-PCR 检测Ⅰ型 胶原 COL Ⅰ 、骨钙素 OCN 、骨保护素 OPG 、核因子-κB 受体活化因子配体 RANKL 基因的表达。 结果 1 收集葡萄糖作用3 天后的MG63 细胞株，CCK-8 法检测结果显示：16.7、 33.3mmol/L 葡萄糖组抑制细胞增殖 P 0.05 ，且5.5/16.7mmol/L 、5.5/33.3mmol/L 葡 萄糖交替培养组抑制作用更明显 P 0.01 ，而5.5mmol/L 葡萄糖浓度组无显著变化； 2 不同浓度葡萄糖分别干预MG63 细胞6、12、18 天后，检测细胞内ALP 的活性，结 果显示：16.7、33.3mmol/L 葡萄糖组细胞表达ALP 均降低 P 0.05 ，尤其在第6、12 天时，33.3mmol/L 组变化较显著 P 0.01 ； 3 RT-PCR 结果显示：16.7、33.3mmol/L 葡萄糖组OPG、OCN 表达下调 P 0.05 ，尤其在33.3mmol/L 浓度时更显著 P 0.01 ； 而RANKL 在33.3mmol/L 时表达上调 P 0.05 ，COL Ⅰ无明显变化 P 0.05 。 结论 高糖及波动性高糖明显抑制成骨细胞增殖，高糖环境可下调成骨细胞内 ALP 活性、OCN 基因的表达，表明高糖可减少成骨细胞数量，同时减缓成骨细胞基 质成熟、矿化，从多个阶段减弱成骨细胞的成骨能力。进一步的实验结果显示，高糖 下调OPG 的表达、上调RANKL 的表达，使OPG/RANKL 比值下降，从而激活破骨 细胞，促进破骨细胞的分化、成熟，加快骨吸收，可能是糖尿病性骨质疏松的重要发 病机制之一。 关键词：