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生物技术的安全性和伦理问题 食物安全、生物安全、环境安全、实质性等同、基因污染、超级杂草、过敏蛋白、治疗性克隆、生殖性克隆、人类伦理道德、胚胎分级、基因诊断、染色体检查、试管婴儿、设计试管婴儿、肉毒杆菌毒素（阻滞神经末梢释放乙酰胆碱引起肌肉麻痹） * 单元网络 基因工程关键词 目的基因、 受体细胞、 限制核酸内切酶、 DNA连接酶、 转化、 黏性末端、 磷酸二酯键、 运载体、 质粒、 标记基因、 启动子、 终止子、 基因组文库、 CDNA文库、表过载体、重组质粒、 农杆菌转化法、 T-DNA、 显微注射法、 感受态细胞、 基因探针、 DNA分子杂交法、 抗原抗体杂交法、 杂交带、 维持稳定和表达 运载体 基因重组 提取目的基因 全能性 单克隆抗体制备 受精 早期胚胎培养 卵裂期 囊胚期 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸之间形成 的磷酸二酯键 作用 部位 携带目的基因进入 受体细胞 拼接 DNA 片段，形 成重组 DNA 切割目的基因和 载体 作用 载体 DNA 连接酶 限制酶 基因工程 1．实质：在分子水平上利用特殊工具将特定基因转入受体细胞，使其产生所需性状。 2．基本工具： 质粒、λ噬菌体的衍 生物、动植物病毒 E·coliDNA 连接酶、 T4DNA 连接酶 EcoRⅠ限制酶 SmaⅠ限制酶 常用 类型 ①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制 ②有多个限制酶切割位点 ③具有特殊的标记基因 ①E·coliDNA 连接酶只能连接黏性末端 ②T4DNA 连接酶能连接黏性末端和平末端 ①识别特定的核苷酸序列 ②在特定位点上切割 作用 特点 (条件) 3.操作程序： (1)目的基因的获取： ①目的基因：指编码蛋白质的结构基因 。 ②途径： a．从基因文库中获取。 b．人工合成：化学合成法、反转录法。 c．利用 PCR 技术扩增。 (2)基因表达载体的构建： ①目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。 ②组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因(常用抗生素基因)。 (1)目的基因是指基因工程操作中的外源基因，它是能编码某种蛋白质的结构基因，如生物的抗虫基因等。 (2)使用同一种限制酶切割目的基因和运载体(运载体，带有标记基因)。 (3)受体细胞有植物、动物、微生物之分，植物细胞可以是卵细胞(受精卵)、体细胞，动物细胞一般用受精卵。 (4)目的基因导入受体细胞不是基因工程成功的标志，基因工程成功的标志是目的基因表达成功。 3.PCR技术与DNA复制的比较(见下表) PCR扩增仪 DNA分子 脱氧核苷酸 DNA聚合酶 (3)将目的基因导入受体细胞： Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA→表达 转化过程 原核细胞 受精卵 体细胞 受体细胞 Ca2＋处理法 显微注射法 农杆菌转化法 常用方法 微生物细胞 动物细胞 植物细胞 生物种类 (4)目的基因的检测和鉴定： 包括抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；基因工程产品与天然产品进行活性比较，以确定功能是否相同等 个体水 平鉴定 同上 抗原－抗体杂交 是否翻译出蛋白质 同上 分子杂交技术(DNA和mRNA之间) 是否转录出mRNA 是否显示出杂交带 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间) 目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 分子水 平检测 结果显示 方法 检测内容 类型 3．蛋白质工程与基因工程的比较 4.基因工程的应用 (1)植物基因工程的应用 　(2)动物基因工程的应用 【典例 1】(2012 年浙江高考)天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因 B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因 B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是 A ．提取矮牵牛蓝色花的 mRNA ，经逆转录获得互补DNA，再扩增基因 B B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因 B C．利用 DNA 聚合酶将基因 B 与质粒连接后导入玫瑰细胞 D．将基因 B 直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞 [名师点拨]提取矮牵牛蓝色花的mRNA，逆转录得到DNA，然后扩增，可获得大量的基因 B，A 正确；从基因文库中获取目的基因，只要根据目的基因的相关信息和基因文库中的信息进行筛选对比即可，不需要