微生物与环境监测论述.pptVIP

微生物与环境监测 Microbiology Department. College of Resource Environment SWU. Li Yong 一、指示微生物 指示微生物（indicator microorganism）或称指示菌（indicator bacteria） 是在常规环境监测中，用以指示环境样品污染性质与程度，并评价环境卫生状况的具有代表性的微生物。 主要生物性污染：细菌、真菌、病毒等各类微生物均有。 1.细菌总数 细菌总数（total bacteria count）：指环境中被测样品，在一定条件下（培养基成分、培养温度和时间、pH、通气状况等）培养后所得的1m1或lg检样中所含的细菌菌落总数。 它反映环境中异养型细菌的污染度，也间接反映一般营养性有机物的污染程度。 1．液态与固态对象中的细菌总数 天然水体、饮水、饮料等液体物 土壤、污泥、堆肥、食品、化妆品、药品等固态物， 常用倾注平板培养法或平板表面涂布培养法。 国家卫生标准中规定： 营养肉汤琼脂培养基， 将经过一定倍数稀释的样品悬液，定量接种于琼脂培养基平板，或倾注混匀，或表面均匀涂布； 在有氧条件下，37℃培养48h观察平板上菌落生长结果。 2．空气中的细菌总数 平板暴露沉降法 仪器法 平板暴露沉降法： 采用直径9cm平皿，将营养琼脂平板在1.2 m高处暴露5 min，37℃培养48h，计数生长菌落数。 测定的结果不是十分准确。 经济方便，有实用价值。 仪器法中以固体撞击式采样器多用。 结果： 采用个／m1为单位来表示 cfu（colony forming unit）表示 ：指单位体积、单位表面积或单位质量检样中的菌落形成单位。 细菌总数的卫生标准 2.霉菌和酵母菌总数 霉菌和酵母菌数（fungi and yeast count）是指环境中被测样品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或lm1检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数。 霉菌和酵母菌是异养型微生物，能致病或产毒素。 检测方法 用倾注培养平板法。多采用孟加拉红（虎红）培养基、高渗察氏培养基或加有抗菌素的马铃薯—葡萄糖培养基。 环境样本作一定倍数稀释后，定量注入灭菌平皿。 倾入培养基混匀，凝固后置入25～28 ℃温箱培养3～5天观察平板上菌落生长情况并计数。 结果： 以每毫升或每克检样中菌落形成单位（cfu／m1或g）来表示。 二、粪便污染指示菌 病原菌一般在环境中存在的数量不大，而且检测方法较复杂，难以直接测定。 其他微生物作为代表，间接指示肠道病原菌存在。 粪便污染指示菌。 理想条件： （1）是人畜粪便中的正常菌，且数量比粪便中其他菌为多； （2）受人畜粪便污染的环境中可检出，而未受污染环境无该菌存在； （3）排出至环境后，该菌存活时间与肠道致病菌相当或略长； （4）对氯等消毒剂及其他不良因素的抵抗力略强于肠道致病菌； （5）检出与鉴定方法比较简便迅速。 大肠杆菌较理想 ，109个／ml；但鉴定方法比较复杂 ； 含有大肠杆菌在内的总大肠菌群与粪大肠菌群。 1.总大肠菌群 总大肠菌群（total co1iform），也称大肠菌群（coliform group或co1iform）； 它们是一群能在37 ℃，24 h内发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 形成特殊的菌落特征； 大肠菌群不是分类学上的一个名称，而是人为定义的名词。 肠杆菌科细菌主要包括4个菌属： 埃希氏菌属（Escherichia）在此菌属中与人类生活密切相关的仅有一个种，即大肠埃希菌也称大肠杆菌； 其次有柠檬酸杆菌属或称枸橼酸杆菌属（Citrobacter）、 克雷伯菌属（Klebsiella）、 肠杆菌属（Enterobacter）。 （1）测定方法 1．多管发酵法（multiple-tube fermentation），又称最大可能数法（most probable number，MPN） 主要步骤： ①初发酵试验： 加入含有乳糖蛋白陈培养基（液）中，经37 ℃培养24 h， 观察产酸产气情况以初步判别是否有大肠菌群存在。 ②平板分离。 将初发酵试验产酸产气的发酵管分别接种在伊红美蓝琼脂平板上，置37℃培养24h，观察菌落形态。 挑选可疑为大肠菌群细菌的菌落涂片、革兰氏染色、镜检和进行证实试验。 ③复发酵试验（证实试验）。 上述可能为大肠菌群的菌落再次接人乳糖蛋白陈培养液，置37℃温箱培养24h后观察结果。 观察结果： 复发酵试验中仍有产酸产气者即最后确证为有大肠菌群存在。 根据初发酵管的数目及试验所用的检样量，利用数理统计原理或查阅专用统计表，最后算出每毫升检样中大肠菌群的最可能数目。 2.滤膜法（membrane filtration technique，M