2.3纤维素的微生物的分离课程.ppt

4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上 （1）制备鉴别培养基:参照课本旁栏中的比例配制 （2）倒平板操作 （3）涂布平板： 培养基组成 提供的主要营养物质 CMC-Na 5~10g 碳源 酵母膏 1g 碳源、氮源、生长因子 KH2PO4 0.25g 无机盐 土豆汁 100mL 碳源、生长因子 琼脂 15g 凝固剂 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL 鉴别纤维素分解菌的培养基 (水溶性羧甲基纤维素钠) 羧甲基纤维素钠又称羧甲基纤维素，简称CMC或CMC-Na。羧甲基纤维素钠的来源为棉花或纸浆等纤维用水媒法或溶媒法制成。为白色或微黄色纤维状或颗粒状粉末或粗粉，无臭、无味，溶于水，有吸湿性。在面条、速食面条、速食米粉中添加量0.1% ～ 0.5%，可使制品膨胀而组织润滑，口感良好，不易变形；在面包、饼干、糕点中添加0.1%～0.2%，可防止水分蒸发和老化，防止油脂渗出，使产品表面光滑，口感细腻；在肉类制品、禽蛋、水 果、蔬菜中则以2%～3%的水溶液喷洒在食物表面形成一种极薄的膜，可长期贮存食物，保持风味，防止发酵，食用时用水冲洗即可；CMC无营养价值，会吸水胀润，使人有饱腹感，可以用作减肥食品。 纤维素分解菌的鉴定培养基为何要加入土豆汁？ 1、微生物对于碳源的利用是有一定顺序的，先利用好用的（如土豆汁里的淀粉）再利用难用的（如纤维素），即便是纤维素分解菌也是如此2、之前因为目的是培养，不用担心不能形成菌落的问题，所以用纤维素作为唯一碳源，把纤维素分解菌初步筛选出来。后来鉴别的时候因为进行了涂布，菌体密度大大下降，为了让单个菌体更好的存活下来，形成菌落，就必须先让这个单细胞菌体发展到一定数量，于是在鉴别培养基中要加入一定量的土豆汁以提供淀粉这种好利用的碳源，当然此时淀粉分解菌也发展起来了，但是加入的淀粉量毕竟是少数， 在淀粉分解菌还未能发展到一个菌落的时候淀粉就用完了，只剩下纤维素了，此时发展到一定数量的纤维素分解菌就能继续利用纤维素发展成一个菌落，而淀粉分解菌因为不能继续利用纤维素于是增殖受阻（这也是为什么当我们观察到淀粉分解菌形成假阳性反应的时候只是一个淡淡的圈，没有纤维素分解菌形成的圈那么明显）。所以，本试验中加入土豆汁的原因就是为了先让单个的纤维素分解菌繁殖到一定数量，以便形成菌落 4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上 （1）制备鉴别培养基:参照课本旁栏中的比例配制 （2）倒平板操作 （3）涂布平板： 将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布到平板培养基上，30℃倒置培养。 ⑷挑选产生透明圈的菌落(参照课本刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落,即为分解纤维素的菌落.) 方法一：先 ，再加入刚果红进行颜色反应。 方法二：在 时就加入刚果红。 培养微生物 倒平板 5.刚果红染色法 挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 这两种方法各有哪些优点与不足？ 染色法 优点 缺点 方法一 方法二 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐 刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便不存在菌落混杂问题 1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈 2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 比较 项目 分解尿素的细菌 纤维素分解菌 选 择 培养 原理 培养基类型 目的 鉴 定 培养基 原理 现象 方法 在细菌分解尿素的化学反应 中，细菌合成的脲酶将尿素 分解成了氨，氨会使培养基 的碱性增强，pH升高。在培 养基中加入酚红指示剂，如 果pH升高指示剂会变红 刚果红可以与纤维素形成 红色复合物，当纤维素被 纤维素酶催化分解后红色 复合物无法形成，培养基 上就会出现以纤维素分解 菌为中心的透明圈 观察菌落周围是否有着色的 环带出现来鉴定尿素分解菌 观察菌落周围是否出现 透明圈来筛选纤维素分解菌 脲酶检测法 刚果红染色法 方法一中NaCl溶液的作用？ 思考： 漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。用这方法可以判断酶活力的大小，实际上刚果红是结合到培养基的多糖底物，但分解纤维素的细菌可以产生纤维素酶，能分解这个多糖底物成为单糖，这样刚果红就不能结合上去了，氯化钠溶液就可以使结合不牢的刚果红洗去，这样就留下大大小小的透明圈，大的透明圈当然分解纤维素的能就强！ 在产生明显的透明圈的菌落，挑取并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯化培养。 6、纯化培养 四、结果分析与评价 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养基在培养过程中没有