实验5、叶绿体色素的提取及含量测定讲述.pptVIP

实验5 叶绿体色素的提取与含量测定 一、目的 掌握叶绿体色素的提取方法与含量测定方法 二、原理 1、提取原理：叶绿体色素是酯类化合物均不溶于水，而溶于含有水的有机溶剂，故常用95％的酒精和80％丙酮提取，或用酒精、丙酮和水的混合液提取。叶绿体色素易受光氧化，提取色素应在弱光中进行，并避光保存色素。新鲜的叶片可用无水丙酮提取。叶干粉用85％丙酮提取。 2、测定原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其消光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯–比尔定律，某有色溶液的消光度 D 与其中溶质浓度 C 和液层厚度 L 成正比，即： D = kCL （ 1 ） 式中： k 为比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为 1cm 时， k 为该物质的比吸收系数。各种有色物质溶液在不同波长下的比吸收系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的消光度而求得。 如果溶液中有几种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总消光度等于各组分在相应波长下消光度的总和，这就是消光度的加和性。测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素 a 、 b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在 3 个特定波长下的消光度 D ，并根据叶绿素 a 、 b 及类胡萝卜素在该波长下的比吸收系数即可求