实验五：分光光度法测定血清蛋白含量讲述.pptVIP

分光光度法测定血清蛋白含量 实验目的 1.学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。 ?2.掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。 3.掌握紫外-可见分光光度计的使用方法。 常识 紫外光：10-400 nm；可见光：400-780 nm（可被人们的眼睛所感觉）;自760nm至400μm的电磁波称为红外线，红外线是不可见光线 实验原理 紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。 ①定性分析：吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状.②定量分析：常采用标准曲线法，即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。 方法一：标准曲线法原理 蛋白质分子中存在着含有共轭双键的络氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，使蛋白质在270~~290nm波长范围内具有吸收紫外光的性质，其蛋白质溶液的吸收值与其浓度成正比，以此可做定量分析测定。 方法 测定一系列浓度不同的标准溶液的吸光度， 以吸光度为纵坐标，标准溶液（蛋白质溶液）浓度为横坐标绘制出280nm出血清蛋白质的标准曲线， 再以相同条件下处理待测样品并测定其吸光度，从而可以从标准曲线上查出相对应的待测液溶度。 试剂：0.15mol/L Nacl溶液 、