选修3《现代生物科技专题》知识点B5活页版讲述.docx

专题1 基因工程 1.基因工程：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 2、基因工程的原理：基因重组 一、DNA重组技术的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）作用部位：磷酸二酯键 （4）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 .②六种酶的比较： 实质模板作用 部位作用结果限制酶切割目的基因或载体不需要磷酸 二酯键形成黏性末端或平末端DNA连接酶催化两个双链DNA片段 连接起来不需要形成重组DNA分子DNA聚合酶催化脱氧核苷酸单链 与单个脱氧核苷酸连接需要 （DNA单链）形成新的DNA分子DNA水解酶催化DNA分子水解不需要形成脱氧核苷酸DNA解旋酶催化DNA分子双链解旋不需要碱基对间的氢键形成单链DNA分子RNA聚合酶催化RNA的合成需要 （DNA单链）磷酸 二酯键形成新的RNA（1）基因重组的三种类型： ①基因的交叉互换：减I前期； ②基因的自由组合：减I后期； ③基因工程：可定向改造生物性状。 （2）对限制酶的理解： ①限制酶是一类酶，而不是一种酶； ②限制酶的成分均为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强碱或强酸均易使之变性失活； ③限制酶作为酶类，其催化作用具有高效性、专一性和作用条件较温和等特点； ④在原核细胞内，限制酶起切割外源DNA，防止寄生生物侵染的作用。如细菌 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 （3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。 注解： ①天然质粒需要经过人工改造后，才能用作基因工程中的载体； ②基因工程中的载体与细胞膜上的载体蛋白的区别 基因工程中的载体细胞膜上的载体蛋白来源细菌的质粒、噬菌体、动植物病毒细胞膜上的蛋白质作用将目的基因转移到宿主细胞中，并能在宿主细胞中对目的 基因进行大量复制运载要进出细胞的某些物质③对限制酶和载体切割位点的说明 a.若用于切割载体的限制酶有多个切点，则切割后载体可能丢失含有复制起始点的片段，重组DNA分子进入受体细胞后便不能进行自主复制； b.切点所处位置必须在载体本身需要的基因片段之外，以避免载体因目的基因的插入而失活。 二、基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤:目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指：编码蛋白质的基因 。 2.基因组文库：包含了一种生物的所有基因。 部分基因文库（cDNA文库）：只包含了一种生物的一部分基因。 人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 ①反转录法： 目的基因的mRNA单链DNA双链DNA（即目的基因） ②化学合成法： 已知蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列目的基因的核苷酸序列目的基因 PCR技术扩增目的基因 （1）概念：PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过这一技术，可以在短时间内大量扩增目的基因。 （2）原理：DNA双链复制在体外将基因的核苷酸序列不断地加以复制，使其数量呈指数形式扩增（约为2n，n为扩增循环的次数）. ②过程：可采用PCR扩增仪，进行扩增 ③PCR的反应条件： 条件作用在一定的 缓冲液进行提供相对稳定的pH环境四种脱氧核苷酸作为合