第二章生物目标产物分离策略总结.ppt

第一节 生物目标产物分离过程的技术基础 第二节 分离的化学过程 第三节 分离的物理过程 第四节 目标产物分离过程 （一）动物材料 选择动物材料时要注意其生理状态（例如采用胸腺时必须是小牛）。 动物材料种类： 脏器 血液和分泌物 （三）水生生物 1.海洋生物 主要种类 海藻、腔肠动物、节肢动物、软体动物、棘皮动物、鱼类、爬行动物、海洋哺乳动物。 2.淡水生物 主要种类：鱼类、两栖类（蟾蜍类）。 四、对提取TP溶剂pH的要求 分离提取或鉴定TP的溶液pH的要求： ① 有利于TP的解离、沉淀物的形成和稳定； ② 有利于TP沉淀或共聚物的解离，提高回收率； ③ 在解离和沉淀的过程中，TP只有物理性状的变化而无化学结构和特性的转变； ④ 所分离物质的可溶性好，鉴定的成分在形成有色物质时为专一性物质的反应。 （一）依据分离性质选择 (1) 生产性实验： 要从物质分离角度出发，选择对样品进行粉碎、匀浆、过滤、收集、除垢、干燥及制品分析等的设施。 (2) 有效物质成分类的分析鉴定： 考虑样品的称量、溶解、过滤并便于检测或定量测试，选择称重器具、常规容器、量具及分光度比色测定的器具。 (2）验证性分离： 这类分离性工作虽然资料较多，可以照搬，但是对提高工作效果，促进对生产的指导毫无益处，一定要多找出几种方法，对所测参数加以比较，找出共同点和不同点，优点和缺点，然后吸收众多方法的优点，改造其中的缺点，设计自己的方案 (3) 定性定量的兼性分离： 根据上述两个原则认真挑选。由于这类工作一般具有综合性，既有定量分析又有定性分析，量大、任务重、处理的材料多，使用的方法和技术路线较复杂，途径和环节较多，因此，尽量选取工作效率高、精确度大、分辨率好的器具。 （二）对方法的设计选择 （1) 探索性分离： 首先通过充分阅览资料文献，大量收集信息； 然后对其加以分析，比较找出问题， 对近1-2年SCI、EI及同类著名期刊所发表的同类研究报道中所采用的方法加以思考，结合自己的思路，选择性吸收利用，对其方法中所使用的条件要有充分的掌握，才能使自己有所创新。 （三）TP分离器具和方法选择的忌讳 (1) 符合现实条件： 成功分离需要有精良的仪器和方法，但勿凭主观想象，超越客观实际。必须在力所能及的范围内，否则设计的分离方案只是空中楼阁，无法实现。 (2) 根据所设计的分离方案选择器具： 分离方案是选择器具的依据，如生产性的实验，时时刻刻离不开物质的分离。不思而言，其离心机是关健，层析柱和浓缩干燥少不了，对于TP的分析鉴定离不开量具和分光光度计等。 (3) 所选择的仪器、方法勿贪大求全： TP的生产过程贵在思路，有些分离本身就不需要复杂的步骤。 (4) 忌分离方案设计与实践应用脱轨： 基于生化分离目的要求的精确性、敏感性、理化因素的影响，每个方法步骤的提出、设备的选择、试剂的运用，要注意温度、pH,离子强度对TP活性、存在状态的影响。 第四节 目标产物分离过程 一、生物TP的分离过程 分离的TP主要来源于生物反应过程。生物反应的产物属于细胞、游离的细胞外代谢产物、细胞内代谢产物、残存底物及惰性组分组成的混合液。 常见的生物药物、天然药物（中药）和食品添加剂的分离制备是通过细胞（包括微生物和动植物细胞）培养生产生物物质的（图9-1）。 二、生物分离过程的特点 （一）生物物质易失活 生物TP的活性大多在生物体内的温和条件下维持并发挥作用，当在高温，pH改变以及某些化学药物存在等环境因素急剧变化时不仅极不稳定，使活性降低甚至丧失，而且原料液中常存在降解TP的杂质（可水解蛋白质的蛋白酶）。 因此，必须设计合理的分离过程和操作条件，实现TP的快速分离纯化，获得高活性TP。 （二）生物TP与人类生活息息相关 用作医药、食品和化妆品的生物产物的分离纯化过程必须将原料液中含有的热原及具有免疫原性的异体蛋白质等有害人类健康的物质清除，并且防止这些物质在分离操作过程中从外界掺入。 （三）需通过具有高度选择性的分子识别技术或高效分离方法除去TP的类似物 原料液中不仅存在与目标分子在结构、成分、理化性质上极其相似的分子及异构体，形成用常规方法难以分离的混