第五章+微生物的生长及其控制方案.ppt

测生长量 （1）制标准曲线（OD~No） （2）测菌液浊度，查图表得出细菌数量 提问：为什么不考察细菌个体的生长呢？ 在实际工作中如接种菌种以启动新的水处理设施，投加新鲜污泥时，接种的细菌不习惯于新环境，会出现或长或短的迟缓期，迟缓期的出现会增加操作时间，降低工作效率。 湿热灭菌法 ①湿热灭菌法是指用100℃以上的加压蒸气进行灭菌。 ②湿热灭菌效果好的原因：湿热蒸气不但透射能力和热传导强，而且湿热时微生物吸收高温水分，还能破坏维持蛋白质空间结构和稳定性的氢键，从而加速这一重要生命大分子物质(菌体蛋白)的凝固变性。 湿热温度下，多数细菌和真菌的营养细胞在60℃左右处理5-10min后即被杀死，酵母菌细胞和真菌的孢子稍耐热些，要在80℃下才被杀死，细菌的芽孢最耐热，一般要在120℃下处理15min才被杀死。 ③湿热灭菌的种类 (i) 常压法 a. 巴氏消毒法(pasteurization)：因最早由法国微生物学家巴斯德用于果酒消毒，故名。这是一种专用于牛奶、啤酒、果酒或酱油等不宜进行高温灭菌的液态风味食品或调料的低温消毒法。 此法可杀灭物料中的无芽孢病原菌(如牛奶中的结核分枝杆菌或沙门氏菌)，又不影响其原有风味。巴氏消毒法是一种低温湿热消毒法，处理温度变化很大，一般在60～85℃处理30min至15 s。 具体方法可分两类： 第一类是经典的低温维持法(low temperature holding method，LTH)，例如用于牛奶消毒只要在63℃下维持30min即可； 第二类是较现代的高温瞬时法(high temperature short time 或flush point，HTST)，用此法作牛奶消毒时只要在72℃下保持15 s。 高温瞬间巴斯德消毒法的操作流程图 b. 煮沸消毒法：采用在100℃下煮沸数分钟的方法，一般用于饮用水的消毒。 c. 间接灭菌法(fractional sterilization或tyndallization) 方法是：将待灭菌的培养基放在80～100℃下蒸煮15～60min，以杀灭其中所有的微生物营养体，然后放至室温或37℃下保温过夜，诱使其中残存的芽孢发芽，第二天再以同法蒸煮和保温过夜，如此连续重复3天即可在较低的灭菌温度下同样达到彻底灭菌的良好效果。例如，培养硫细菌的含硫培养基就可采用此法灭菌，因其内所含元素硫在99～100℃下可保持正常结晶形，若用121℃加压灭菌法，就会引起硫的熔化。 又称分段灭菌法或丁达尔灭菌法。适用于不耐热培养基的灭菌。 (ii)加压法 a. 常规加压蒸气灭菌法(normal autoclaving)：一般称作“高压蒸气灭菌法”，这是一种利用高温(而非压力)进行湿热灭菌的方法，优点是操作简便、效果可靠，故被广泛应用。 其原理是：将待灭菌的物件放置在盛有适量水的专用加压灭菌锅内，盖上锅盖，并打开排气阀，通过加热煮沸，让蒸气驱尽锅内原有的空气，然后关闭锅盖上的阀门，再继续加热，使锅内蒸气压逐渐上升，随之温度也相应上升至100℃以上。为达到良好的灭菌效果，一般要求温度达到121℃(压力为1kg/cm2或15磅/英寸2)，时间维持15～20(30)min。有时为防止培养基内葡萄糖等成分的破坏，也可采用在较低温度(115℃即0.7kg/cm2或10磅/英寸2)下维持35min的方法。 加压蒸气灭菌法适合于一切微生物学实验室、医疗保健机构或发酵工厂中对培养基及多种器材或物料的灭菌。 三、氧化还原电位(Eh) 1、氧化还原电位 氧化环境具有正电位，还原环境具有负电位。自然界中，Eh上限+820mV(富氧环境)，Eh下限－400mV(富氢环境)。 2、各种微生物要求的氧化还原电位 好氧微生物：+300～+400mV；Eh+100mV，好氧微生物生长； 兼性厌氧微生物：Eh在+100mV以上时进行好氧呼吸，Eh在+100mV以下时进行无氧呼吸； 专性厌氧细菌：要求Eh为－200mV～－250mV； 3、污水处理系统中 好氧活性污泥法系统中Eh在+200～+600mV是正常的； 高负荷生物滤池：Eh随滤池处理效果降低而下降，自+311mV降至－39mV。 4、影响Eh的因素 (1) 用某些还原剂：如抗坏血酸(维生素C)、硫二乙醇钠、H2S、金属铁等(使Eh下降)； (2) 通空气(O2)，加氧化剂(使Eh变大)。 (1) 氧分压：氧分压高，Eh高；反之，则低； (2) pH：环境中pH降低，Eh低；反之则高。 5、Eh的控制 四、溶解氧 专性好氧菌:氧分压为0.2×101Kpa 微好氧菌：氧分压为(0.003～0.2)×101Kpa 好氧菌 兼性厌氧（兼性好氧）菌：有氧、无氧条件均可 耐氧厌氧菌