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代谢工程与调控Metabolic Engineering and Regulation and Control 北京化工大学 生命科学与技术学院 张 鹏 交课程论文：E-mail: nankaizp@163.com 课件下载：公共邮箱：buctbio@163.com 登录密码：buctlife。文件中心-网盘-代谢工程 主要参考书 储炬、李友荣，《现代工业发酵调控学》，化学工业出版社，2002 李友荣等，《发酵生理学》，湖南科技出版社，1989 修志龙、滕虎等译，《代谢工程的途径分析与优化》，化学工业出版社，2005 张惠展，《途径工程》，轻工业出版社，2002 张克旭等，《代谢控制发酵》，轻工业出版社，1998 主要参考书 David White ，The Physiology and biochemistry of Prokaryotes, Oxford University Press,1999 Gregory N. et al., Metabolic Engineering, Academic Press, 1998 P.F. Stanbury, et al., Principles of Fermentation Technology, Pergamon Press, 1984 Gottschalk G., Bacterial Metabolism, Springer-Verlag, New York, 1979 主要内容 与发酵有关的微生物代谢规律和调节机制，为控制工业发酵过程提供可行的手段和理论依据，为研究新工艺、新产品开阔思路。 通过微生物的生理生化与遗传，从整体观念来阐述工业发酵与生物合成的代谢调节与控制机制。 主要内容 了解微生物生长过程、生长调节以及环境因素对生长影响；了解微生物如何调节自己的生长，适应各种环境条件的变化；了解基础代谢与能量转换；了解一些重要的初级、次级代谢等。 重点了解生理和代谢的协调，了解有关的代谢调节机制以及打破或避开固有调节机制，过量生产某些产物。了解代谢工程定义、方法和应用。 课程安排与成绩评定 课堂讲授与课堂讨论。 最终成绩以课程论文（50%）、课堂讨论表现（20%）、结课考试（30%）三部分评定。 课程论文要求。 一章：微生物生长1.1 生长与分化 次级产物数量Q= μ · x μ-比生长速率；x-菌浓度 一、生长形式 （一）细菌：壁生长，菌龄测定 （二）酵母：芽殖 （三）丝状菌：菌丝末梢伸长和分枝 深层培养：分散和菌丝球（直径0.1~10mm) 菌丝球中营养物与产物分布图（插入） 菌丝球生长各阶段形态（插入） 菌丝球受培养条件（搅拌、供氧、温度）影响，特别与碳源有关。 （四）不对称分裂：柄细菌、硅藻 （五）无定形裂殖：绒泡菌 二、细胞的生长繁殖周期 两次细胞分裂活动的间隔。研究此问题将有助于建立发酵过程动力学模型。 （一）同步培养 同步培养技术：硝酸纤维素膜法、离心沉降法。 酵母同步培养：细胞阶跃式增长（插入） 任何单个细胞周期不是一确定值，但群体是一确定值，细胞增代频率（插入） （二）E. coli 细胞周期： 低生长速率：世代时间比DNA复制时间长； 高生长速率：每个细胞有几个染色体，每个有多个复制叉，世代时间短于DNA复制时间。 （三）真核生物细胞周期： 酿酒酵母：分为四个时间，内圈完成后才开始第二循环。（插入图） （四）基因表达 细菌蛋白、RNA合成连续，但有一部分RNA变化，个别蛋白、酶合成是阶跃式。 真核酶合成大多数是断续的。 细胞内许多相互作用的反应顺序节奏不同。代谢不仅受空间（酶分布）也受时间限制。用数学方法描述活细胞动力学过程时要谨慎。 1.2 生长测定 用什么方式表达生长，尚无定论。 活细胞数、细胞质量、代表性组分、代谢活动，但没有一种方法适用于所有情况。 含有非细胞性固体的培养液中，难以用直接方法测细胞数或干重。 不管用什么方法，解释结果时要谨慎！ 一、细胞数目测定 （一）直接显微计数 亚甲基蓝染色测活细胞数。不适用多细胞。 （二）平板活菌计数 制备分散很好的细胞或孢子悬液，每皿30~300个菌落（cfu-菌落形成单位）。 载片快速法、膜过滤法。 （三）自动细胞计数和分检法 coulter计数器（500个细胞/秒） 流动式细胞光度计（3000个细胞/秒） 二、细胞总量直接测定 （一）测细胞干重 离心或过滤。DCW（干细胞重） 注意事项：①②③④ 可用于计算比基质消耗速率或比生长速率： mg基质或产物/DCW?小时 （二）比浊法 在600~700nm测得1个吸收单位等于1.5克DCW/升。 （三）离心压缩细胞体积法（PCV） 三、细胞总量间接测定（培养基含有大于10%非细胞性固体） 间接法基于营养物消耗、产物形成或细胞生长间有化学计量关系。