食品毒理学第八章分解.pptVIP

雄性生殖毒性试验 精子分析：是较为敏感指标。包括精子计数、精子运动能力以及精子形态的检查。 畸形精子症是正常形态的精子少于50%，即精液中畸形精子超过50%。 精子穿透试验：又称精子体外受精。 用去掉透明带的金黄地鼠卵代替人卵做精子穿透试验。 两个培养皿每个内放20个左右的去掉透明带金黄地鼠卵子与患者的精子一起培养观察受精的百分比，作为对照的是已生育过的自愿者的精液。 卵子的受精率(受精的卵子占全部孵育的卵子的百分率)和受精指数(穿透卵子的精子总数与卵子总数之比)两个指标。 大鼠睾丸支持细胞和间质细胞分离培养 支持细胞-分泌多种生物活性物质，对生精细胞起到支持营养作用。 支持细胞具有较强的糖酵解能力，可将葡萄糖转化为乳酸和丙酮酸。 乳酸含量和乳酸脱氢酶活性的变化常被作为反映支持细胞功能以及对生精细胞能量代谢的影响和对生精过程干扰的指标 间质细胞-分布在睾丸曲精细管的结缔组织中，呈圆形、梭形或多角形，体积较大，胞核有1-2个核仁，胞浆吩咐，呈嗜酸性，含有大量滑面内质网，主要功能分泌雄激素，可以促进男性生殖器官的生长和发育，可督促睾丸制造精子，还可以诱发和保持男子性的欲望。 睾丸中标志酶活性检测 含量增高—乳酸脱氢酶同工酶、山梨醇脱氢酶、透明质酸酶、α-磷酸甘油脱氢酶等 含量下降—6-磷酸葡萄糖脱氢酶、苹果酸脱氢酶、三磷酸甘油醛脱氢酶、柠檬酸脱氢酶等。 雄性激素检测 FSH-支持细胞-雄性激素结合蛋白-雄激素聚集 LH-间质细胞-合成和分泌睾酮 Testosterone 雄性生殖器毒性病理检查 睾 丸 附 睾 前 列 腺 精 囊 雌性生殖毒性试验 发情周期的观察 正式试验前，对实验动物连续做引导脱落细胞观察8-12d。按每组10只选出发情周期正常的受试动物。 实验处理开始后对引导脱落细胞观察至少25d 统计分析各组动物发情周期平均持续天数，将各处理组与对照组比较，是否出现周期异常。 排卵的观察 染毒应在发情间期进行，在染毒的第6d处死动物。 取出卵巢称重 分离黄体和非黄体称重，计数黄体数 计数卵细胞数 也可进行卵巢病理检查，计数各期卵泡。 雌性激素检测： 雌激素活性测定、血浆雌二醇放免分析法、血浆孕酮放免分析。 病理组织学检查 阴道、子宫、输卵管、卵巢等以及肾上腺和脑垂体。 繁殖毒性的评价 生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。 评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。 一、试验方法原则 材料：性成熟大鼠，或小鼠、家兔 剂量：三组 等比级数 最高：出现轻度中毒，不死亡或死亡率小于10％ 中：极轻微中毒 低：无中毒症状 染毒方式：口服——饲喂法、灌胃法 数量：雌雄各16－20只，或雌16－20只，雄8－10只 （2）试验方案 a、三代两窝试验 近年来许多国家与机构多规定采用两代一窝或一代一窝试验法，两代一窝生殖试验法基本程序与三代两窝试验法相同，但只进行到第二代F2，每代只交配一窝。 （3）观察指标 在上述各种生殖毒性试验中，根据哺乳动物全部生育繁殖过程，可观察下列4个指标： 受孕率：反映雌性动物生育能力 正常分娩率：反映雌性动物妊娠过程是否受影响 幼仔出生存活率：反映雌性动物分娩是否正常 幼仔哺育成活率：反映雌性动物授乳哺育幼仔的能力 * （5）结果评定 主要计算畸胎总数和畸形总数。计算时还要对剂量效应（反应）关系加以分析。 常用评价指标： 活产幼仔平均畸形出现数 畸胎出现率 母体畸胎出现率 注意： 通过统计计算方法进行剂量组与对照组对比，必须具有统计学意义才能认为是阳性结果。 应该掌握实验动物的自然畸形发生率，不要轻易做出致畸作用的结论 动物物种和品系差异较为显著，要求在两种动物进行试验 对动物致畸作用的外源化学物是否对人致畸尚无理想可靠的方法。 致畸指数判断： 致畸指数—母体LD50/胎体最小致畸剂量。 致畸指数＜10：一般不致畸 致畸指数10-100：致畸 致畸指数＞ 100：强致畸物 国际生命科学研究所 （International Life Sciences Institute，ILSI） 1989年根据动物试验中发育毒性效应的类型、严重性和发生率将化学物分为四类，并规定各类型的不同的安全系数范围，用以评定待测物发育毒性的危险度。 根据药物对人类的孕