生化分离工程讲稿.ppt

第七章 亲和层析第五节 亲和层析的特殊类型 亲和层析的特殊类型 第五节 亲和层析的特殊类型 一、凝集素亲和层析 将凝集素以共价形式与不溶性载体相连接作为亲和吸附剂的层析技术。可用于从混合物中分离或分析糖类及糖复合物，如多糖、糖蛋白、细胞膜碎片等。 区分非常相近的抗原或抗体，只需一步就能从大量的复杂蛋白质溶液中分离出极少量的目的抗原或抗体。 第五节 亲和层析的特殊类型 二、免疫亲和层析 免疫亲和层析是利用抗原和抗体之间的高特异性亲和力进行层析分离的，它以抗原抗体中的一方作为固定相，对另一方进行吸附分离。 区分非常相近的抗原或抗体，只需一步就能从大量的复杂蛋白质溶液中分离出极少量的目的抗原或抗体。 第五节 亲和层析的特殊类型 ㈠ 抗体的选择和纯化 ㈡ 抗体的偶联 1．抗体的制备 2．抗体的偶联 3．封阻未反应的活化基团 4．免疫亲和层析的层析过程 第五节 亲和层析的特殊类型 三、金属螯合亲和层析 金属螯合亲和层析是基于蛋白质表面的一些氨基酸残基与固定化金属离子的亲和力不同而对蛋白质进行分离纯化。 其在蛋白质纯化、复性和空间定位以及酶的固定化和金属离子清除等方面具有广泛的应用。 第五节 亲和层析的特殊类型 四、染料配体亲和层析 染料配体亲和层析是以仿生染料，主要是含一氯或二氯三嗪基团的三嗪染料，作为配体的亲和层析。这些三嗪染料可偶联在含羟基的载体上，因此可以纯化很多蛋白质和酶。 主要功能团是无色三嗪燃染料配体，原料价廉易得，性价比高，适合大规模分离生产。 第五节 亲和层析的特殊类型 五、共价层析 共价层析与前面所介绍的其他亲和层析不同，在纯化对象和固定相之间形成了共价键。它首先利用亲和吸附剂与待分离生物分子的共价结合，而将待纯化物吸附上去，之后再用适当的处理方法将共价键打开，从而将待纯化物释放出来。 因此最适合的共价键就是二硫键。 第五节 亲和层析的特殊类型 第五节 亲和层析的特殊类型 * * * LOGO 凝集素亲和层析 免疫亲和层析 金属螯合亲和层析 燃料配体亲和层析 共价层析 免疫亲和层析前的准备 金属螯合层析法： Ni 固相载体 His His His Protein Metal Chelate Affinity Chromatography imidazole elution -O-C-C-C-O-C-C-C-N OH C-COOH C-COOH OH 共价层析的分离过程 5．亲和柱的再生 4．目的蛋白的洗脱 3．洗去杂蛋白 2．上样吸附 1．平衡 有时是“样品预处理” 又可以是“还原洗脱” the end 大致层析过程： * * *