核酸与核苷类药物及合成工艺讲述.ppt

粘性红酵母发酵法 国外发现一株粘性红酵母可高产胞二磷胆碱。 菌体培养基（g／L）：葡萄糖50； 多胨5； 酵母膏2； KH2PO4 2；（NH4）2HPO4 2； MgSO4.7H2O 1； pH6.0， 经28℃，22h培养，收集菌体，菌体经0.2mol／L磷酸缓冲液pH7.0洗涤，备用。 产生胞二磷胆碱的反应体系（g／L）：葡萄糖140；MgSO4.7H2O 6；5＇－CMPNa2 20；磷酸胆碱20；析干菌体50；反应体系中保持磷酸缓冲缓pH7.0、0.2mol／L，30℃，28小时产胞二磷胆碱9.8g／L，对5′-CMP收率92.5％。 提取工艺：反应液离心除去菌体，用0.5mol／L KOH调pH8.5，上dowex 1×2（酸型）树脂，水洗后用甲酸梯度洗脱，在0.04mol／L甲酸洗脱液中收集产品，含胞二磷胆碱溶液上活性炭柱，丙酮-氨水溶液洗脱，减压浓缩，乙醇中结晶。 3、作用与用途 胞二磷胆碱是卵磷脂生物合成的前体。当脑功能下降时，脑组织内卵磷脂含量显著减少。本品能促进卵磷脂生物合成，兴奋脑干网状结构，特别是上行网状联系，提高觉醒反应，降低“肌放电”阈值，恢复神经组织机能，增加脑血流量和脑耗氧量，从而改善脑循环和脑代谢，大大提高患者的意识水平。 临床用于减轻严重脑外伤和脑手术伴随的意识障碍，治疗帕金森氏症，抑郁症等精神疾患。由于胞二磷胆碱是在ATP存在下参与磷脂的合成反应，故合用ATP可提高本品疗效；用于脑外伤，脑出血患者可合用止血剂和防水肿药；用于震颤麻痹可合用L-多巴；用于精神病可合用镇静药。 1、酶合成法： 啤酒酵母泥 CMP + 磷脂酰胆碱 胞二磷胆碱 Ph8，28℃ 2、粘性红酵母发酵法： 粘性红酵母 5‘-CMPNa+磷酸胆碱 胞二磷胆碱 pH7，30℃ 3、提取工艺： 离心 KOH [离子交换] 洗脱 反应液 去菌体 洗脱液 Ph 8.5 甲酸 [活性炭吸附] [减压、浓缩] [结晶] 洗脱液 成品 丙酮、氨水洗脱 OVER Thanks a lot 四、核苷的制备 核苷是多种核苷类药物的原料，在核酸类药物中占主导地位。 （1）以核苷及其结构类似物、衍生物为主药物多达几十种； （2）核苷类药物在抗病毒、抗肿瘤、增强免疫方面占重要地位； （3）核苷的发酵水平大大高于核苷酸，所以常做后者的前体物质。 1、RNA化学水解法制备核苷： 2、发酵法生产核苷 产率高、周期短、控制容易、产量大。 共同特点： （1）使用磷酸单酯酶活力很强的枯草芽孢杆菌或短小芽孢杆菌为诱变出发菌株； （2）具有特定标记的有变株； （3）发酵培养时需提供限量生长因素。 原菌株： （1）AMP强烈抑制PRPP转酰胺酶的活性，控制总代谢途径； （2）AMP抑制SAMP合成酶； （3）GMP抑制IMP脱氢酶 生产菌株： （1）酶6、7缺失（为腺嘌呤缺陷型）积累IMP---肌 苷（肝炎辅助药）； （2）酶4缺失（为鸟嘌呤缺陷型）积累XMP---黄苷； （3）酶5缺失积累鸟苷。 发酵法生产肌苷 （1）肌苷生产工艺 （2）发酵工艺条件： 碳源为葡萄糖 保证充足的氮源 磷酸盐的影响 Mg+、Ca+有促进作用 生长因子腺嘌呤或酵母粉要亚适量 最适发酵温度为30--34℃，pH6.0—6.2 需大风量,高溶氧和低CO2 发酵法生产肌酐的工艺流程 发酵法生产鸟苷和黄苷 鸟苷产生菌的特征： （1）嘌呤核苷酸分解酶活力强； （2）SAMP合成酶