4.菌落总数和大肠菌群分析.pptxVIP

菌落总数和大肠菌群主要内容样品的采集与送检菌落总数测定大肠菌群测定一、样品的采集和送检采样瓶：洗净、包扎、灭菌自来水：烧灼或酒精擦拭龙头，放水5-10min水源水：距水面10-15cm送检时间：=2h(常温)，=4h(冷藏)无菌取样检样固体样品：在电子天平上称取25g+225mL0.85%灭菌生理盐水液体样品：直接取用固体样品称量用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按“去皮”键，当显示屏上的数字显示为“0”时，可开始称量。去皮键二、菌落总数测定器材与试剂样品，无菌水，营养琼脂培养基，吸管，平皿等。概念：菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含微生物菌落的总数。1、步骤2、结果3、计算肉眼观察，可用放大镜，可标记必要时分区计数，菌落成片者作废计算公式：4、注意事项无菌操作标记何时更换吸管吸吹混匀琼脂培养基保温生化安全常识三、大肠菌群测定大肠菌群的概念：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。1、步骤初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液）每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL36±1℃培养24±2h，观察倒管内是否有气泡产生24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。2、结果初发酵对比产气情况注意：样液加入培养基后不能振摇试管。12复发酵试验用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中36±1℃培养48±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。3、计算按确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。21.50.152114、注意事项MPN表中的阳性管是LST管数。对产酸但未看到气泡的发酵，用手轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生，应作进一步试验。固体样品1g经10倍稀释后加入1ml，其样品只有0.1g，故应按0.1g计，不应按1ml计。任务：检验自来水/过滤水中的含菌量1、实验目的：掌握常用培养基的配制方法掌握高压蒸汽灭菌锅、天平等实验仪器的使用方法学习无菌操作技术2、实验原理：培养基的概念加热灭菌的方法（笔记本）检验自来水/过滤水中的含菌量3、实验器材：实验试剂：稀酸、稀碱、营养琼脂培养基实验仪器：天平、电炉、高压蒸汽灭菌锅、培养箱实验器皿：250mL锥形瓶、100mL量筒、培养皿、大试管、玻璃棒、其他辅助材料：报纸、纱绳、pH试纸4、实验过程：准备→配制→灭菌→加样→培养→观察准备实验材料配制培养基36℃保温培养倒入培养基样品按无菌操作加入平皿中培养基分装、灭菌250mL锥形瓶、100mL量筒、大试管、玻璃棒、电炉、培养皿、报纸、纱绳、天平、灭菌锅、pH试纸、药品检验自来水/过滤水中的含菌量准备热水→称量→加热溶解→定容→调pH→分装→灭菌→冷却至46℃→倒平板→保温实验每2位同学配制一份200mL的营养琼培养基和一份10mL蒸馏水，分别装于250mL锥形瓶和大试管中，灭菌后使用。以自来水、没灭菌的过滤水和已灭菌的无菌水作为样品；取3个平皿，每个平皿中分别加入1mL上述样品灭菌后的培养基冷却至46℃左右，马上倒入已加入1mL样品的3个平皿中，转动平皿使样品和培养基混合均匀制作好的平皿，冷却凝固后，标上记号（区分所加样品），倒置放于36℃的培养箱中培养48小时。检验自来水/过滤水中的含菌量5、实验结果报告48小时（2天）后，到实验室观察平皿中微生物的生长情况。计数并记录每个平皿中生长出来的菌落的数量，填写在报告中。观察记录后，需要把所有平皿清洗干净。若过滤水菌含量高于自来水，或无菌水样品中出现菌落，请思考问题产生的原因。样品：自来水样品：过滤水样品：无菌水菌落总数（个/mL）