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Omentin, a novel adipocytokine inhibits TNF-induced vascular inflammation in human endothelial cells;;1. Introduction;;;;2. Materials and methods;2.1 细胞培养和形态学检查;2.2 western blotting ;2.3 环鸟甘酸(cGMP)水平的测定;2.4 实验试剂;;2.5 统计方法;3. Results;3.1 omentin对HUVEC NO 产生通路的影响; 图1 omentin 对 HUVEC eNOS (A) 和 AMPK (B) 磷酸化的影响
HUVEC经过omentin(300 ng/ml, 20 min)处理,用Western blotting方法检测eNOS (Ser 1177) (n= 14–19) 和 AMPK (Thr 172) (n= 11–16) 的磷酸化水平。* p 0.05
;图2 omentin 对 HUVEC 中cGMP 水平的影响
HUVEC经过omentin(300 ng/ml, 10 min)处理,收集蛋白裂解物,采用cGMP酶联免疫试剂盒检测cGMP水平。* p 0.05
;3.2 omentin 对TNF-α诱导HUVEC炎症因子的影响; 图3 (A)omentin对TNF-α诱导HUVEC产生JNK的影响
用TNF-α(5 ng/ml)分别处理经过omentin(300 ng/ml, 30 min)预处理和未经过预处理的HUVEC24小时后,用Western blotting方法检测COX-2 (n= 9)表达。*p 0.01 vs. cont; # p 0.05 vs. TNF;## p 0.01 vs. TNF.
;3.3 omentin对TNF-α诱导HUVEC炎症信号的影响; 图3 (B)omentin对TNF-α诱导的HUVEC产生JNK磷酸化的影响
用TNF-α(5 ng/ml)分别处理经过omentin(300 ng/ml, 30 min)预处理和未经过预处理的HUVEC20分钟,用Western blotting方法检测JNK (n= 13)表达。
*p 0.01 vs. cont; # p 0.05 vs. TNF;## p 0.01 vs. TNF.
;;图3(C)JNK抑制TNF-α诱导的HUVEC产生COX-2的影响
用TNF-α(5 ng/ml)分别处理经过SP600125 (10lM, 30 min)预处理和未经过预处理的HUVEC 24小时,用Western blotting方法检测COX-2 (n= 4)表达。
*p 0.01 vs. cont; # p 0.05 vs. TNF;## p 0.01 vs. TNF.;3.4 NO参与了omentin抑制TNF-α诱导COX-2的产生;图4 NOS 抑制剂对 omentin 抑制 TNF-α 诱 导的 HUVEC 产生COX-2 效果的影响
用TNF-α(5 ng/ml)分别处理经过omentin(300 ng/ml, 30 min)预处理和未经过预处理的HUVEC24小时,omentin +L-NAME 组表示,加 omentin之前进行L-NAME(300lM, 20 min )预处理。用Western blotting方法检测COX-2 (n=7-10)表达。
*p 0.01 vs. cont;##p 0.01 vs. TNF; ψp 0.05 vs.+omentin;4. Discussion;;;;;;;;;
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