电泳技术在临床上说课.ppt

电泳技术在临床上的应用 蒋 刚 健 使用范围和检测原理 电泳技术就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术. 在生化检测中, 主要用于分离各类蛋白分子. 按电泳技术分类 固体支持介质电泳 移动界面电泳 滤纸电泳 区带电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 稳态电泳 移动界面电泳是将被分离的离子（如阴离子）混合物置于电泳槽的一端（如负极）,在电泳开始前,样品与载体电解质有清晰的界面.电泳开始后,带电粒子向另一极（正极）移动,泳动速度最快的离子走在最前面,其他离子依电极速度快慢顺序排列,形成不同的区带.只有第一个区带的界面是清晰的,达到完全分离,其中含有电泳速度最快的离子,其他大部分区带重叠 区带电泳是在一定的支持物上,于均一的载体电解质中,将样品加在中部位置,在电场作用下,样品中带正或负电荷的离子分别向负或正极以不同速度移动,分离成一个个彼此隔开的区带.区带电泳按支持物的物理性状不同,又可分为滤纸和其他纤维膜电泳、凝胶电泳等。 稳态电泳:带电颗粒在直流电场作用下迁移一定时间后达到稳定状态，此后电泳条带的宽度不随时间的变化而变化。如：等速电泳,等电聚焦电泳 等电聚焦电泳是将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中,当其处在低于其本身等电点的环境中则带正电荷,向负极移动；若其处在高于其本身等电点的环境中,则带负电向正极移动.当泳动到其自身特有的等电点时,其净电荷为零,泳动速度下降到零,具有不同等电点的物质最后聚焦在各自等电点位置 ,形成一个个清晰的区带,分辨率极高. 琼脂糖凝胶电泳 : 琼脂糖凝胶适用于蛋白质和核酸的电泳支持介质, 成本低, 结果易保存. 聚丙烯酰胺凝胶电泳 : 最常用的定性分析蛋白质的电泳方法, 特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量, 一般用于科研. 毛细管电泳:经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物 电泳技术的医学应用 蛋白质电泳分析是实验室必备的检测手段, 可全面精确, 描绘出患者蛋白质的全貌. 对疾病的早期诊断, 疗效观察及预后判断具有非常重要的临床价值. 根据使用的染料或者是底物的不同，我们可以检测到不同类型的蛋白: 血清蛋白 脂蛋白(运送脂类) 各种酶类 血红蛋白 正确解释电泳结果,为临床对疾病的判断提供可靠参考 电泳技术在临床应用中的意义 急,慢性炎症 * 造血系统疾病: 多发性骨髓瘤, 巨免疫球蛋白血症 * 肾脏疾病 * 肝脏疾病 * 中枢神经系统疾病: 多发性硬化症 血清蛋白电泳 常采用醋酸纤维素薄膜或琼脂糖凝胶，分离蛋白质区带后用氨基黑或丽春红S等染色后，扫描各区带进行吸光度检测。目前采用的自动电泳仪进行血清蛋白质分析，其电泳区带整齐、分离效果好、操作速度快；电泳时间短，重复性好，值得推广应用。 血清蛋白电泳检测的目的是什么? 检测异常 : 含量的变化 : 条带中蛋白含量的增加或减少 性质的变化 : 异常条带的出现 临床意义 将电泳作为常规检测之一, 基于蛋白含量的 变化, 有助于我们对以下疾病的筛查 : 炎症 营养不良 肺气肿 对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病: 骨髓瘤 巨球蛋白血症(Waldenstrom) 细菌和病毒感染 在这些情况下, 必须要做其他辅助测试, 比如说免疫固定, 使用不同类型的抗血清对异常蛋白进行检测. (对于后期治疗有很重要的指导意义) 什么情况下必须进行电泳检测? 血液沉降速度发生异常变化 出现恶性疾病征兆 在免疫球蛋白定量检测中发现 某一种免疫球蛋白出现大量异常增加 电泳区带分析 白蛋白区带 双白蛋白,或者一条宽峰,或者在白蛋白条带出现附属条带可能是由以下原因造成 : 遗传性双白蛋 暂时性的双白蛋白血症可能是由于药物刺激导致的 急性胰腺炎导致的双白蛋白血症 : 大量的胰酶的出现可以导致白蛋白降解 A..注射白蛋白，大剂量青霉素后 双白蛋白血症 下列情况下Alpha2区域会出现增加现象: - 炎症症状