中药血清药理实验方法总结.pptVIP

中药血清药理实验的几个关键技术 血清经上述方法处理后，除去了大量固体成分，包括95%以上的蛋白质，80% 以上的糖，大部分 Ca2+、Mg2+等电解质。 未处理的血清1mL可形成70～80 mg冻干粉，处理后1mL血清仅形成冻干粉5 mg 左右。 中药血清药理实验的几个关键技术 目前含药血清在采集后多经过56℃, 30min灭活处理。 血清灭活既可灭活掉血清中的部分补体,减弱对培养细胞的非药物性影响，又减少微生物感染，符合常规细胞培养要求。 但是灭活过程属于热处理范围,有可能丧失血清中一部分热稳定性差的药物活性成分。更为重要的是经灭活后，血清中的有效成分发挥药理效应的环境与体内实验和临床产生药效的体内环境不相符。 4.4.3血清是否应该灭活 * * * * 中药血清药理实验方法 若干问题探讨 中药血清药理实验方法若干问题探讨 研究背景 1987年，日本学者田代真一提出“血清药理学”的概念； 1990年，姜廷良教授在全国中医方剂研讨会上介绍了日本有关中药血清药理学研究的动态和情况之后，国内中医领域开展了相关的研究工作； 1992年，中药血清药理学的研究设立为国家中医药管理局青年基金课题 1996年，中药血清药理学获得国家自然科学基金资助。 1 中药血清药理实验目的 中药血清药理实验方法若干问题探讨 在体外尽量准确地再现整体实验时药物与机体相互作用的真实过程，揭示药物作用的时效关系和量效关系。 血清药理学方法属于半体内实验方法。 2 中药血清药理实验思路 中药血清药理实验方法若干问题探讨 动物灌服中药或复方制剂后，在一定时间采集血液、分离血清进行体外药理实验，在细胞、亚细胞水平进行超微、生化、受体、基因等方面进行作用及机制研究。 ①体外抗菌试验 ④血清药代动力学实验 ③神经细胞、平滑肌细胞、免疫细胞培养试验 ②体外抗肿瘤试验 中药血清药理实验方法若干问题探讨 ⑤药效—药动关联分析 3 中药血清药理的研究范围 4 中药血清药理实验的几个关键技术 中药血清药理实验方法若干问题探讨 4.1动物选择 家兔和大鼠为首选。为减少个体差异的影响，供体动物至少4只，且雌雄各半，并将每组动物的血清混合。 离体器官、组织、细胞的供体动物和含药血清的供体动物应具有较好的同质性， 即种属、年龄、性别、体重等方面相同或相近。 中药血清药理实验的几个关键技术 是否要造模？ 血清供体动物最好造模，病理模型制备的含药血清更能反映药物的真实疗效。 中药血清药理实验的几个关键技术 4.2给药方案 ★★增大给药剂量法： 参考公式，即给药剂量=在体试验的给药剂量×反应系统中被稀释的倍数。 存在以下两个问题： (1)血药浓度并不能与给药剂量呈等倍数的提高。 (2)给药剂量可以提高的倍数受到灌胃药物浓度和体积的限制，不可能达到公式所要求的量。 通过加大给药剂量制作的含药血清不能反映正常剂量药物的临床药效。 4.2.1 给药剂量 中药血清药理实验的几个关键技术 ★★血清冻干粉法： 将含药血清制成冷冻干燥粉(冻干粉)，以冻干粉加入反应系统，使之达到需要的浓度。 所谓“血清冻干粉”，即在制备得含药血清后，首先在冰箱中冻成固体冰块，然后在-70℃条件下，真空干燥蒸干水分，形成干燥粉末。 采用这种方法可以根据需要控制反应系统中的药物浓度。 中药血清药理实验的几个关键技术 ★★临床日用量倍数法 以临床日用量的5， 10，30倍确定给药剂量；或以整体模型动物的有效剂量（即为临床成人剂量的8－18倍量）确定剂量为妥。 中药血清药理实验的几个关键技术 ★★单次加倍给药法 ★★2次给药法（第1次给药后2h，再以相同剂量重复1次） ★★3次给药法（连续给药3次，第l间隔20h，第2间隔4h） ★★7-10d法(1次/d，连用7-10 d） 由于中药及其复方成分复杂,半衰期很难测定,所以7～10d给药为权宜之计。 4.2.2 给药次数与时间间隔 中药血清药理实验的几个关键技术 4.3采血时间 ★★标准法 先用少量动物进行预试验，通过不同采血时间进行比较后确定最佳采血时间。 这种方法得到的结果较为确切，但个体性较强，同一种药物的不同指标或同一种指标在不同的药物的达峰时间都不同，所得结果不能通用。 中药血清药理实验的几个关键技术 ★★通法 将待测药每天给药2次，连续给药3d，末次给药后1h采血。 Ⅰ 在实际操作中