Lumican对胃腺癌腺细胞生物学特性影响和临床意义.pdf

Lumican 对胃腺癌细胞生物学特性影响及临床意义 中文摘要 Lumican 对胃腺癌细胞生物学特性影响及临床意义 中文摘要 肿瘤微环境在肿瘤的发生、发展和转移的各个阶段中都起着至关重要的作用。其 中细胞外基质蛋白是肿瘤微环境的重要组成部分，在肿瘤中常常发现基质蛋白有异常 表达，其有助于肿瘤的进展和转移，近年来研究显示，Lumican 的表达与许多恶性肿 瘤的生长和转移相关，但其在肿瘤发生发展中的确切作用还不明确。因此我们探讨了 SLRP 家族成员Lumican 在胃腺癌发生发展中的作用，从而进一步来理解Lumican 与 人类肿瘤的关系。应用RT-PCR 、荧光定量PCR 、免疫印迹及免疫组织化学技术，在 mRNA 及蛋白水平检测了 Lumican 在胃腺癌组织中的表达情况；应用慢病毒载体系 统建立了Lumican 过表达和特异性干扰细胞株，利用CCK-8 实验，平板克隆及裸鼠 皮下成瘤实验，分析了过表达或干扰 Lumican 表达对胃腺癌细胞生长的影响； Transwell 及 Matrigel 胶穿实验，分析了其对胃腺癌细胞迁移和侵袭的影响；流式细 胞术检测了 Lumican 表达上调或下调时胃腺癌细胞失巢凋亡率的改变，及 Lumican 上调时胃腺癌细胞周期的改变；免疫印迹技术和细胞免疫荧光检测了 smad2、samd3 及samd4 的表达和活化。同时我们还构建了Lumcian 重组蛋白pQE30-HLumican （分 子量约40kDa ）原核表达载体系统及V152-HLumican(分子量约55kDa)真核表达载体 系统，利用 CCK-8 实验，分析了两种重组蛋白对胃腺癌细胞生长的影响；通过 Transwell 实验，分析了两种重组蛋白对胃腺癌细胞迁移能力的影响。流式细胞术检 测了 V152-HLumican 重组蛋白对胃腺癌细胞失巢凋亡的影响；软琼脂克隆形成实验 观察了其对胃腺癌细胞非锚定生长的影响；裸鼠皮下成瘤实验观察了其对胃腺癌细胞 体内生长的影响。研究结果表明：胃腺癌组织中Lumican mRNA 表达水平显著高于 癌旁正常粘膜组织，差异有统计学意义 （P0.05 ）。胃腺癌组织中Lumcian 主要以其 分子量为55kDa 大小的糖蛋白形式存在，40kDa 大小的核心蛋白（core protein ）也有 少量表达。免疫组化结果显示Lumican 蛋白在胃腺癌组织的表达率显著高于癌旁正常 粘膜（91.67% 比7.5%，P0.01 ），其表达水平与胃腺癌患者的性别、年龄、肿瘤发生 部位、Laren 分型、是否为印戒细胞癌、脉管侵犯、癌栓无明显相关，差异无统计学 I 中文摘要 Lumican 对胃腺癌细胞生物学特性影响及临床意义 意义（P0.05 ）；而与胃腺癌的浸润深度（P0.01 ）、有无淋巴结转移 （P0.01 ）、有无 远处转移 （P0.05 ）、TNM 分期 （P0.01 ）、肿瘤大小（P0.05 ）和是否为早期胃腺癌 （P0.01 ）密切相关。Kaplan-Meier 生存统计结果显示，Lumican 表达强阳性、阳性、 弱阳性和阴性患者的总体生存率分别为: 48.17%、53.56%、68.48%和89.48%，随着其 表达增强，生存率逐渐减小，差异有统计学意义 （P0.01 ）。Lumican 过表达能够显 著增强胃腺癌细胞内核心蛋白的表达，而其糖基化蛋白增强不明显；Lumican 表达受 干扰后，核心蛋白表达明显下降，而其糖基化蛋白下降不明显。Lumican 过表达能够 抑制胃腺癌细胞在体内外的生长，抑制胃腺癌细胞迁移和侵袭，增加失巢凋亡率，同 时Lumican 基因过表达能够减缓细胞周期进展，一定程度引起G1 期的阻滞。Lumican 表达受干扰后，胃腺癌细胞生长得到促进，迁移、侵袭和抗失巢凋亡能力增强。Lumcian 可能通过抑制smad4 的表达，及smad2 和smad3 的活化来调控胃腺癌细胞增殖、迁 移、侵袭和抗失巢凋亡。pQE30-HLumican 重组蛋白可抑制胃腺癌细胞的增殖及迁移。 V152-HLumican 重组蛋白可促进胃腺癌细胞的增殖及迁移