中药化学一般方法2论述.ppt

第5节 中药化学成分鉴定和结构研究简介 化合物的纯度测定 结构研究的主要程序 结构研究的主要方法 结构研究实例 1.化合物的纯度测定 晶形 结晶均匀、一致 熔点 熔点明确、敏锐，熔距0.5-1.0℃ 薄层色谱或纸色谱 三种以上不同展开剂展开，均呈现单一斑点 HPLC、GC等色谱方法 呈现单一色谱峰 2.结构研究的主要程序 3.结构研究的主要方法 （1）确定分子式、分子量，计算不饱和度 分子式的确定 元素分析法 → 实验式（结合分子量） → 分子式 同位素丰度比法（﹤500） ↑ HR-MS → 分子量、分子式 不饱和度的计算 　 U=1+n4-0.5(n1-n3) 3.结构研究的主要方法 （2）化学法确定化合物结构骨架与官能团 颜色反应 化学反应 3.结构研究的主要方法 （3）波谱法研究化合物结构 　UV 　IR 　NMR 　MS 　ORD 　CD 　X-射线单晶衍射 定义 分子中价键的伸缩及弯曲振动在光的红外区域（4000-500cm-1）引起吸收，测得的图谱为红外光谱。反映功能团与波长的关系。只需5-10μg。4000-1500cm-1为特征区，1500-500cm-1为指纹区。 应用 已知化合物：测定红外光谱叠图或检索红外光谱数据。 未知化合物：用于确定官能团以及芳环取代的判断等。 定义 化合物分子在磁场中受电磁波的辐射，有磁距的1H原子核吸收一定能量产生能级的跃迁，即发生核磁共振，以吸收峰的频率对吸收强度作图所得。氢同位素中，1H丰度最大，信号灵敏，1H-NMR易测，应用广。 应用 测定化学位移（δ0-20ppm）、谱线的积分面积及裂分情况（重峰数及偶合常数），提供分子中1H的类型、数目及相邻原子或原子团的信息。 化学位移（Chemical shift, δ） 1H核因周围化学环境不同，其外围电子云密度以及绕核旋转时产生的磁的屏蔽效应也不同。不同类型的1H共振信号出现在不同的区域，可识别。 峰面积 由于1H谱上积分面积与分子中的总质子数相当，故如知分子式，可据此算出每个信号所相当的1H数。 信号的裂分及偶合常数 磁不等同的两个或两组1H核在一定距离内会因相互自旋偶合干扰而使信号发生分裂，表现出不同的裂分，如singlet、doublet、triplet、quartet、multiple等。 NOE效应 当两个质子HA和HB在空间非常接近时，对HA做饱和照射时，HB的信号强度会增加，这种现象称为NOE效应。 2D－NMR 　1H-1H COSY：相邻质子间的偶合关系。 　13C-1H COSY： 　 HMQC，1H和与其直接相连的13C的偶合关系。 　 HMBC，1H和与其远程偶合的13C的关系。 定义 化合物分子在磁场中受电磁波的辐射，有磁距的13C原子核吸收一定能量产生能级的跃迁，即发生核磁共振，以吸收峰的频率对吸收强度作图所得。 应用 提供的结构信息是分子中各种不同类型及化学环境的碳核化学位移（δ0-200ppm），异核偶合常数及弛豫时间，其中利用度最高的是化学位移。 噪音去偶谱（全氢去偶谱COM或宽带去偶谱BBD） 采用宽频的电磁辐射照射所有1H使之饱和后测定13C-NMR谱。1H对13C的偶合全部消除，所有13C信号在图谱上均作为单峰出现，无法确定连接的1H数，但对判断13C信号的化学位移很方便。 选择氢核去偶谱（SPD）或远程选择氢核去偶谱（LSPD） 对某个或某几个氢核进行照射，以消除其偶合影响。此时峰形发生改变的信号只是与之有偶合关连的13C信号。 DEPT 通过改变照射1H核的脉冲宽度（θ）或设定不同的驰豫时间，使不同类型的1H信号在谱图上呈单峰并分别呈现正向峰或倒置峰，灵敏度高，信号间重叠少，一种常规测定方法。 定义 MS是记录分析样品在质谱仪中经高温气化（300℃），在离子源受一定能量冲击产生阳离子，同时发生某些化学键的有规律的断裂，而后在稳定磁场中按质量和电荷之比（m/z）顺序进行分享并通过检测器表达的图谱。 　 应用（测定分子式和分子量） 已知化合物：通过比较质谱图进行鉴定。 未知化合物：由碎片峰及裂解特征推定或复核分子的部分结构。 EI-MS（电子轰击电离, electron impact ionization） 测定时需先加热气化再电离，故易热分解或难气化的化合物，测不到分子离子峰。 FD-MS（场解析电离, field desorption ionization） 将试样稀溶液涂在钨丝发射极上，通过真空密封系统进入离化室作为阳极，再安装阴极，加10