(本科)基因诊断研讨.ppt

* 肿瘤相关基因的诊断 原癌基因与抑癌基因的检测 在抑癌基因中，p53基因是人类肿瘤中最 常发生失活的抑癌基因 检测p53基因第7外显子热点突变的芯片探针序列 * 英国三姐妹一起割乳预防癌症 BRCA基因突变与乳腺癌的高度易感性相关，可通过对该基因一些突变位点的检测来预测患病的风险性 * 第五节 基因诊断在法医学上的应用 一、DNA指纹个体特异性的分子基础 串联重复序列（tandem repeat，TR) 二、DNA指纹分析技术在法医学中的应用 * 1985年，英国遗传学家Jeffreys等人用TR的核心序列为探针进行RFLP分析时，检测到许多HVR，所产生的图谱具有高度个体特异性，达到如同人类指纹的高度专一性，所以称为DNA指纹图谱 (DNA fingerprinting） Alec John Jeffreys Oxford，UK * VNTR常两侧酶切位点固定，但两点之间的串联重复拷贝数不同，导致酶切后产生不同长度的片段 * 法医案检中的基因诊断技术 VNTR（可变数目串联重复序列/小卫星）的核酸分子杂交分析 STR（短串联重复序列/微卫星）的PCR 分析 SNP的基因芯片检测 * 人类DNA指纹图 * DNA指纹分析用于个体鉴定 目前解决亲权纠纷最简单的办法是先在孩子DNA指纹图中找出非母片段并计数为P，然后分析争议父DNA图，看P条非母带在争议父中出现多少条。如果没有小卫星畸变，孩子DNA图中不会出现无法确定来源的“陌生带”，所有非母带均应出现在生父DNA图中。 * * * 例：PCR产物—序列分析用于基因诊断 Marker N P * 病例SOX9基因HMG box内发生单碱基置换突变R178L(G→T)，如图2所示，左侧正常对照第225位碱基为C，而该患儿为A（反义链中） 例：PCR产物—序列分析用于基因诊断 * ABI 377自动测序仪 * （四）DNA芯片技术是应用前景广阔 的基因诊断技术（DNA chips） 又称为基因芯片(gene chip)、DNA微阵列(DNA microarray)。 DNA芯片技术基础是核酸分子杂交。 * 宏阵列(Macroarray) 高密度 微阵列( Microarray ) 某种HPV诊断芯片 * 应用微电子加工工艺，在玻璃、塑料、硅片等材 料上制备用于生物样品分离、反应或分析的微细结构 目前主要有两大类： 1. 生物活性微阵列 (bioactive microarray) 2. 基因芯片 (gene chip), DNA微阵列 (DNA microarray) 包括多肽、蛋白质、病毒、 细胞等。 蛋白质芯片可直接从体液中检测生物分子（免疫芯片只需少量样品可一次完成对成千上万种抗原或抗体等致病因素或生物样品的检测分析)。 为最重要的生物芯片，广泛用于基因表达谱分析、新基因发现、基因突变及多态性分析、疾病诊断、药物筛选、基因测序等。 生物芯片(biochip) * * * 基因结构异常在DNA水平直接检出 第二节 遗传病的基因诊断 基因突变的检测 1、限制性酶切图谱直接分析法 2、寡核苷酸探针斑点印迹杂交分析法 3、扩增阻滞突变体系 4、单链构象多态性分析法 5、 DNA序列测定 * 基因结构异常在DNA水平直接检出 对于致病基因尚未明确、或虽已明确但尚不知其结构和突变位点，必需借助与致病基因连锁的遗传标记，间接判别致病基因是否存在，称为基因连锁分析。 第二节 遗传病的基因诊断 基因连锁分析 如限制性片段长度多态性间接 (连锁)分析法 * 1.点突变： （1）导致特异性限制性内切酶位点改变 （2）无限制性酶切位点改变 PCR-ASO斑点杂交、反向斑点杂交、等位基因特异PCR（allele specific PCR，AS-PCR） 直接诊断：检测已知致病基因 * DNA序列存在较长的重新排布，包括大片段（数十个碱基甚至数千个碱基）丢失、插入、取代、复制放大和倒位等，这些突变可能引起更大范围内的染色体结构上的改变从而影响多基因功能（染色体突变或畸变），包括染色体的易位、缺失或染色三体（如唐氏综合征）等 2.基因重排：核酸分子探针杂交与PCR * 3. 基因表达异常 mRNA的相对定量分析 mRNA的绝对定量分析 mRNA长度分析 采用RT-PCR及基因芯片表达谱分