9分光光度分析法研讨.ppt

2003－11－5 9.1 概述 9.1.1定义 分光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，包括比色法、可见及紫外分光光度法及红外光谱法等。我们重点讨论可见光区的分光光度法。 9.1.2 分光光度法的特点 a 灵敏度高。常用于测定试样中质量分数为1%~10-5的微量组分，甚至可测定低至质量分数为10-6~10-8的痕量组分。 b 准确度较高。目视比色法的相对误差为5%~10%，分光光度法为2%~5%。 c 应用广泛。几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用目视比色法或分光光度法进行测定。 d 仪器简单、操作简便、快速。 1 相关概念 *吸收光谱：原子吸收光谱和分子吸收光谱。是因物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。 * 单色光：具同一波长的光。 * 复合光：由不同波长组成的光。 * 紫外光：波长200~400 nm。 * 可见光：人眼能感觉到的光，波长在400~750 nm。它是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成的。 * 波段：各种色光的波长范围不同。 * 互补色光：按一定比例混合，得到白光。 * 物质的颜色是因物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。 * 吸收光谱曲线或光吸收曲线：以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图。 * 最大吸收波长：光吸收程度最大充处的波长，用λmax表示。 * 吸光度A(也称消光度E或光密度D)：溶液对光的吸收程度。 9.2 光吸收基本定律 9.2.1 朗伯-比尔定律 当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质时，一部分被吸收，一部分透过介质，一部分被器皿的表面反射。如图所示，设人射光强度为I0收光强度为Ia，透过光强度为It，反射光强度为Ir。 在分光光度分析法中，试液和空白溶液分别置于同样质料及厚度的吸收池中，然后让强度为I0的单色光分别通过这两个吸收池，再测量其透过光的强度。此时反射光强度基本上是不变的，且其影响可以相互抵消。 朗伯(Lambert J H)和比尔(Beer A)分别于1760和1852年研究了光的吸收与溶液层的厚度及溶液浓度的定量关系，二者结合称为朗伯-比尔定律，也称为光的吸收定律。 当一束强度为I0的平行单色光垂直照射到长度为b的液层、浓度为c的溶液时，由于溶液中吸光质点(分子或离子)的吸收，通过溶液后光的强度减弱为I： * 摩尔吸收系数 当浓度c用mol·L-1，液层厚度b用cm为单位表示，则K用另一符号ε来表示。ε称为摩尔吸收系数，单位为L·mol-l·cm-1，它表示物质的量浓度为l mol·L-1，液层厚度为l cm时溶液的吸光度。 例 浓度为25.5μg/50mL的Cu2+溶液，用双环已酮草酰二腙光度法测定，在波长600nm处用2cm比色皿测量A=0.297，计算摩尔吸光系数。 9.2.3 对朗伯-比尔定律的偏离 在分光光度分析中，经常出现标准曲线不呈直线的情况，特别是当吸光物质浓度较高时，明显地看到通过原点向浓度轴弯曲的现象(吸光度轴弯曲)。这种情况称为偏离朗伯-比尔定律。若在曲线弯曲部分进行定量，将会引起较大的误差。 （1）非单色光引起的偏离 （2）介质不均匀引起的偏离 （3）由于溶液本身的化学反应引起的偏离:溶液中的吸光物质常因解离、缔合、形成新化合物或互变异构等化学变化而改变其浓度，因而导致偏离朗伯—比尔定律。 9.3 光度分析的方法和仪器 9.3.1 目视比色法 用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。优点是仪器简单，操作简便，适宜于大批试样的分析。灵敏度高，因为是在复合光-白光下进行测定，故某些显色反应不符合朗伯-比尔定律时，仍可用该法进行测定。主要缺点是准确度不高，标准系列不能久存，需要在测定时临时配制。 9.3.2 标准曲线法 借助分光光度计来测量一系列标准溶液的吸光度，绘制标准曲线，根据被测试液的吸光度，从标准曲线上求得被测物质的浓度或含量。 9.3.4 分光光度计及其基本部件 分光光度计按工作波长范围分类，紫外、可见分光光度计应用于无机物和有机物含量的测定，红外分光光度计主要用于结构分析。分光光度计又可分为单光束和双光束两类。722型分光光度计是数字显示的单光束、可见分光光度计。 分光光度计的基本部件:光源、单色器、比色皿、检测器和显示装置。 *光源 用6~12 V钨丝灯作可见光区的光源，发出的连续光谱在360~800 nm 范围内。 光源应该稳定，即要求电源电压