富氢盐水通过失活RaSERK12MEK12与Akt通路及抑制ROS减轻血管平滑肌细胞的增殖及大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的增生.pdf

附图…………………………………………………………………………71 讨论……………………………………………………………………………………………·74 小结…………………………………………………………………………·75 参考文献………………………………………………………………··76 结论…………………………………………………………………………………………·78 综述一血管损伤及支架植入术后再狭窄机制的研究进展和相应 对策…………………………………………………………………………·79 综述二以组织学观点评估慢性闭塞性冠脉病变的基础导丝技术和标准的 介入策略………………………………………………………………102 致谢…………………………………………………………………………………………………．119 个人简历…………………………………………………………··：………一120 中文摘要 ROS减轻血管平滑肌细胞的增殖及大鼠颈动脉球囊损伤后新 生内膜的增生 摘 要 冠状动脉介入治疗(PCI)对于冠状动脉粥样硬化性心脏病具有划时 代的意义。但是，即便是应用了药物洗脱支架，仍有5．10％的再狭窄率。 smoothmuscle 血管平滑肌细胞(vascular 素刺激下进行增殖和迁移，是动脉粥样硬化和血管再狭窄等血管重塑性疾 病的细胞病理学基础。 活性氧(RoS)和氧化应激涉及到动脉粥样硬化和再狭窄的病理生理 过程，氢气是一种潜在的抗氧化剂，能清除中和自由基(如·OH和 ONOO。)，大量的l临床和实验研究证实氢气是一个清道夫，选择性地中和 ROS并行使着潜在的细胞保护功能。至关重要的是到目前为止氢气行使 这些效能的确切机制还不十分明了。除了其抗氧化效能，有一些特殊通路 可能参与其作用机制。 为了阐明富氢介质对血管平滑肌细胞增殖和迁移作用及其分子机制， 本文在系统研究富氢介质对VSMC增殖、迁移、细胞周期、细胞凋亡、 氧化应激等影响的基础上，进一步探讨其对涉及血管平滑肌细胞增殖迁移 通路的影响，另外在大体上，制作大鼠颈动脉球囊损伤的模型来模拟 PTCA的过程，观察富氢盐水对新生内膜增殖的影响并探讨可能的机制。 实验结果如下： 管平滑肌细胞的的增殖 本部分实验在系统研究富氢介质对VSMC增殖、迁移、细胞周期、 细胞凋亡、氧化应激等影响的基础上，进一步探讨其对涉及血管平滑肌细 胞增殖迁移通路的影响。实验结果如下： 1．1氢气对VSMC增殖活力的影响 我们完成MTT实验来评估氢气对平滑肌细胞增殖活性的抑制效果， 结果显示，氢气干预组平滑肌细胞的增殖活性比对照组明显下降 中文摘要 (32．4+5．2‘％VS73．3+5．1％,／90．01)。 为了评估氢气对血管平滑肌细胞增殖活性的影响是否具有可逆性，氢 气干预组培养48小时后去除氢气继续培养至96小时，培养结束后再检测 细胞的增殖活性，结果显示，氢气对细胞增殖活性的抑制是可逆的，去除 氢气后，血管平滑肌细胞的增殖活性又恢复，这些结果显示氢气行使对平 滑肌细胞增殖活性的抑制作用不具有细胞毒性作用。 氢气对平滑肌细胞增殖活性的作用也用BrdU实验进行分析，结果显 性，并有明显的时效性。 氢气对血管平滑肌细胞增殖的抑制效果进一步被细胞计数所证实，结 用富氢介质孵育的细胞数分别有40％和51％的下降。(尸O．01)。 1．2富氢介质对VSMC迁移活性的影响 富氢介质对FBS诱导的血管平滑肌细胞的迁移活性的抑制效果用伤 口愈合实验证实，结果显示，用FBS处理24h后的增加的迁移血管平滑 肌细胞数为(58．3+13．9)，而同时用富氢介质干预后，其迁移细胞显著下降 (18．6+5．8)尽O．01。 1．3富氢介质阻止细胞周期进入S期 富氢介质对细胞周期的影响用流式细胞仪测定。通过24h血清饥饿法 期，通过10％FBS的诱导使静止的血管平滑肌细胞进入S期，处于G0／G1 处于S期的细胞为(16．7+2．O)％，这些结果显示富氢介质阻止细胞周期进 入S期。 的 为了研究富氢介质抗增殖效果的机制，