组织培养技术答案.ppt

细胞培养技术;一、组织培养的基本概念;细胞培养;器官培养;细胞培养目的与用途;对组织培养的评价;组织培养的发展简史;组织培养细胞生物学;2、脱分化或去分化（Dedifferentiation): 细胞失掉发生分化的能力（培养的肝细胞失掉产生精氨酸酶、氨基转移酶等特性后，则失去储存肝糖原能力）。是基因突变所致 培养细胞在体外生存时间与其分化能力呈反向关系。 细胞分化的关键在于是否存在有诱导细胞发生分化的因子。;培养细胞的形态分类根据是否附于支持物上生长的特性，分为:  贴附型 悬浮型 （一）贴附型 细胞贴附在支持物表面生长，只依赖贴附才能生长的细胞叫做贴附型细胞(Anchorrage-dependent cells)这种现象与细胞分化有关。 ;贴附型细胞的分型;起源：细胞来自中胚层间充质组织。 除真正的成纤维细胞、心肌、平滑肌、成骨细胞血管内皮细胞。 注意：细胞在培养时成为成纤维型细胞是一种惯称,与体内细胞不同。 ;2.上皮型细胞(epithlium cell type) 来自外胚层 特点：扁平不规则多角型、圆形核、细胞紧密相连成细胞增殖数目增多时,整个上皮膜随之移动。边缘细胞很少脱离细胞群而单独活动“ 拉网”现象与起源内外胚层组织有关。 组织: 皮肤表皮及其衍生物(汗腺、皮脂腺)消化道分上皮、肝、胰、肺泡上皮。 ;3. 游走型细胞(wandering cell type) 特点：在支持物上散在生长,不连接成片,胞质伸出伪足或突起呈活跃的游走或变形运动,速度快不规则, 密度大连接成片呈多角形不易与其他类型的细胞 区别。 ;4. 多形型细胞 (polymorphic cell type) 特点： 无规律的形态，如神经细胞。 ;悬浮型细胞(suspended cell type);分型的目的： 方便描述细胞在培养过程中的形态变化。培养条件好时，细胞相对稳定，可反映出起源、正常异常的区别，作为判定细胞生物学性状指标。 ;强调：一般形态并不是一项可靠指标要受各方面影响。 如：反复开关温箱、温度、C02的浓度、培养基变碱、支原体、pH值。细胞在接种时呈三角型状态，经培养一定时间后，细胞在传代前已形成上皮型细胞。 ; 细胞贴壁延展过程;培养细胞的生长和增殖过程; 细胞系（cell line)：初代培养细胞一经传代后，称做细胞系。 无限细胞系： 细胞获永久性增殖能力。核型大多变成异倍体。 克隆形成率（Cloning Efficiency)：细胞被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞小群（克隆）的百分数。 克隆细胞株:从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群. ;（一）?? 细胞生命期(life span of culture cells);老化;1.原代培养期(primary culture) 组织到第一次传代 时间大约为1～4周 特点： 细胞活跃移动,分裂,但不旺盛多呈二倍体核型。 原代与体内原组织形态结构和功能活动基本相似。 各细胞的遗传性状互不相关，细胞相互依存性强，如果把这种稀释分散成单细胞,在软琼脂培养基中进行培养细胞克隆的形成率(cloning efficiency)下降，表明细胞独立生存性差。 ;? 2.传代期(passage) 初代培养细胞一经传代便称之为细胞系(cell line) 特点： 细胞增殖旺盛，并维持二倍体核型，也叫二倍体细胞系(diploid cell line)为了保存二倍体细胞性质，细胞应在初代或传代早期冻存为好。 一般细胞在10代以内冻存。 ;? 冻存配方： 向培养液加入保护剂二甲基亚砜(DMSO)或甘油,封入安瓶中。 存于在液氮中温度可达到－196℃，可长期储存。如解冻后细胞复苏，仍能继续增殖生长，细胞性状不受影响，成为保存细胞最主要的手段。 ; 3.衰退期 特点：细胞仍生存 增殖减慢 不增殖 轮廓增强 衰退凋亡 注意：细胞在三期中的任何一期（一般发生在传代后期或衰退期）在某些因素影响下,如血清质量不佳、病毒污染、温度和pH不稳等,细胞可能发生自发转化(spontaneous transformation);; 细胞可能获得永生性(immortality) 或称为恶性性(malignancy)。细胞获得持久性的增殖能力,这样的细胞群体称为连续细胞系(continuous cell line)。而细胞获得不死性后,细胞核型大多变成异倍体(heteropl