第三章生物样品与样品制备研讨.ppt

第三章生物样品与样品制备;教学要求;第一节 生物样品的种类、采集、制备与贮存;一、生物样品的种类、采集和制备;（一）血液;;（二）尿液;（三）唾液;;（四）组织;（五）头发;二、生物样品的贮存与处理;第二节 离线生物样品制备;一、生物样品预处理目的;二、生物样品预处理应考虑的问题;三、离线生物样品制备方法;;（一）有机破坏法;（二）去除蛋白法;1．加入与水相混溶的有机溶剂 ;2．加入中性盐;3．加入强酸;4．加入含锌盐及铜盐的沉淀剂;5．超滤法;6．酶水解法 ;7．加热法;（三）分离、纯化及浓集;1. 液－液萃取法（LLE）;优点： 分离后萃取液可被蒸发，组分易于富集，因此，操作简单快速，经济实用。 缺点： 易产生乳化现象 萃取液易挥发，有毒性，易污染环境 不能实现自动萃取。;2.固相萃取法（SPE法）;;;;;;;（四）缀合物的水解;1、水解法 酸水解：可??入适量的盐酸溶液 酶水解：葡萄糖醛酸苷酶/硫酸酯酶 2、溶剂解 缀合物(主要是硫酸酯)往往可通过加入的溶剂在萃取过程中被分解，称作溶剂解。 ;（五）化学衍生化─在HPLC法中的应用;HPLC的常用检测器： 紫外吸收检测器 荧光检测器 电化学检测器 ;;衍生化的方法;紫外衍生化试剂包括： 苯甲酰甲基溴和萘甲酰甲基溴类试剂(适于羧酸) 芳香胺类试剂(适于羧酸) 酰氯类试剂(适于羟基) 异氰酸苯酯(PIC)(适于羟基) 2，4-二硝基苯肼(2，4-DNPH)(适于羰基) 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)(适于羰基) 取代苯甲酰氯类试剂(适于伯胺、仲胺) 芳基磺酰氯类试剂(适于伯胺，仲胺) 硝基苯类试剂(适于伯胺，仲胺) 异氰酸酯和异硫氰酸酯(适于伯胺、仲胺);;;;;;;第三节 在线生物样品制备（自学）;前处理示例