微生物的生长及其控制课程方案.ppt

第八章 微生物的生长及其控制;第八章 微生物的生长及其控制;第一节 测定生长繁殖的方法;（一）直接法 1、? 测体积；这是一种很粗放的方法，用于初步比较用。 2、? 称干重：可用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10%-20%。 （1）?????? 离心法： （2）?????? 过滤法: ; （二）间接法 1、比浊法 （1）采用McFarland比浊管进行测定。 这是用不同浓度的BaCl2与稀H2SO4配制成的10支试管，其中形成的BaSO4有10个梯度，分别代表10个相对的细菌浓度(预先用相应的细菌测定)。 （2）采用分光光度计进行测定。 在可见光的450～650nm波段内均可测定．为了对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪，可采用不必取样的侧臂三角烧瓶来进行．测定时，只要把瓶内的培养液倒人侧臂管中；然后将此管插入特制的光电比色计比色座孔中，即可随时测出生长情况，而不必取用菌液。 ;;2、生理指标法： （1) 测含氮量： 根据其含氮量再乘以6.25，即可测得其粗蛋白的含量(因内中包括了杂环氮和氧化型氮)。 此法只适用于细胞浓度较高的样品，同时操作过程也较麻烦，故主要用于科学研究。 (2)测含碳量 ： (3)其他： ;（三）测定微生物生长量应用举例 举例：可以通过细菌生长的快慢来判断某一条件是否适合。 ;二、计繁殖数 ;1、涂片染色法 其计算公式如下： 每毫升原菌液含菌数=视野中的平均菌数X1平方厘米/视野面积X100X稀释倍数 2、比例计数法 3、? 血球计数板法 计数室的总面积为1平方毫米，高0.1毫米，并具有一定刻度。 ;、; 4、电子自动计数器计数法 ;（二）间接法；又叫活菌计数法 1、? 平板菌落计数法 可用倾注或涂布平板等方法进行。此法适用于各种好氧菌或厌氧菌。 一般操作为： 倾注法：10X稀释 1毫升； 涂布法：0.1毫升 1、2、3个平板累加（防止涂布器沾细胞） ; 此法是教学、科研、生产中最为常用的一种活菌计数法。但这种方法在操作时较烦琐且要求操作者技术熟练。其中最重要的是应使样品充分混合，并让每支移液管只能接触一个稀释度的菌液。其误差来源主要在于稀释和培养基温度。 为克服此缺点，国外已出现多种微型、快速、商品化的用于菌落计数的小型纸片或密封琼脂板，其主要原理是利用加在培养基中的活菌指示剂TTC(2，3，5—氯化三苯基四氮唑)，它可使菌落在很微小时就染成易于辨认的玫瑰红色。 ;2、厌氧菌的菌落计数法 一般可用亨盖特滚管培养法进行 。 滚管技术的优点是：试管内壁上的琼脂层有很大的表面积可供厌氧菌长出单菌落，但试管口的面积和试管腔体积都极小，因而特别有利于阻止氧与厌氧菌接触。 ; 小结： 以上介绍了若干测定微生物的生长量或计算繁殖数的主要方法。其中最常用的为称干重、测浊度（用分光光度计）、测含氮量、血球计数板法测总菌数以及用平板菌落计数法测活菌数等方法。必须指出的是：无论采用什么方法都有其优点和使用范围。所以，在使用前，一定要根据自己的研究对象和研究目的的不同，选用最合适的方法。 ? ;第二节 微生物的生长规律;（二）获得同步培养物的方法 1、环境条件诱导法 （1）温度 通过适宜与不适宜温度的交替处理之后可获得同步细胞。 （2）培养基成分控制 ①??? 通过营养成分 ?②通过抑制生物大分子合成的化学物质 ;（3）其他 ①??? 对于光合细菌 ②??? 对于不同步的芽孢杆菌;2、机械筛选法 （1）离心方法 ;（2）过滤分离法 将不同步的细胞培养物通过孔径大小不同的微孔滤器，从而将大小不同的细胞分开，分别将滤液中的细胞取出进行培养，获得同步细胞。 ;（3）硝酸纤维素 滤膜洗脱法 ;细菌的同步生长与非同步生长 ;二、单细胞微生物的典型生长曲线（群体生长规律） （一）生长曲线的定义 定量描述液体培养基中微生物群体生长规律的实验曲线，称为生长曲线。 （二）典型生长曲线 ; 微生物的典型生长曲线;1、延滞期 （1）特点 ①生长速率常数等于零。 ②细胞形态变大或增长。 ③细胞内RNA尤其是rRNA含量增加，原生质呈嗜碱性。 ④合成代谢活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加快，易产生诱导酶。 ⑤对外界不良条件如氯化钠溶液浓度、温度和抗生素等理化因素反应敏感。 ;（2）重要参数：迟缓时间（T） ①??? 定义：微生物在生长过程中，在实际条件下达到对数生长期所需时间与理想条件（即无迟缓期）下达到对数生长期所需时间之差。 ②??? 计算方法 ;（3）产生原因 当微生物接种到一个新的环境时，暂时缺乏足够