蛋白激酶C抑制剂TAM对人脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响和其机制研究.pdfVIP

蛋白激酶 C 抑制剂 TAM 对人脑胶质瘤细胞辐射敏感性的影响及其作用机制的研究 中文摘要 中文摘要 目的 探讨蛋白激酶 C（PKC）抑制剂他莫昔芬（tamoxifen，TAM）联合 X 射 线对人脑胶质瘤 A172 和 U251 细胞生长、细胞周期、凋亡和放射敏感性的影响及 其机制，构建人脑胶质瘤裸鼠原位瘤，在体内验证 TAM 的放射增敏作用。 方法 （一）体外实验 1、MTT 法检测不同 TAM 浓度、不同处理时间脑胶质 瘤 A172、U251 细胞的增殖变化；2、划痕实验观察脑胶质瘤 A172、U251 细胞的 迁移能力；3、克隆形成实验检测 TAM 对脑胶质瘤 A172、U251 细胞的放射敏感 性的影响；4、流式细胞仪测定 TAM 联合 X 射线对脑胶质瘤 A172、U251 细胞的 周期分布和细胞凋亡的影响；5、western-blot 法检测细胞内蛋白表达水平的变化。 （二）体内实验：构建裸鼠脑胶质瘤原位模型，将成瘤的裸鼠随机分为对照 组、放疗组、TAM 组、放疗+TAM 组，每组 5 只。MRI 评估原位瘤裸鼠肿瘤体积 大小，处死裸鼠取瘤组织，免疫组化检测瘤组织中与凋亡相关的蛋白 Bad 的变化。 结果 （一）体外实验：1、TAM 可显著抑制人脑胶质瘤 A172、U251 细胞的 增殖，当 TAM 浓度为 10μmol/L 时，A172 细胞的存活率为 95.1%，U251 细胞的存 活率为 93.9%，且与对照组相比无统计学意义，因此后续实验研究选择 10μmol/L 药物浓度作为实验浓度。2、细胞划痕实验显示 TAM 联合 X 射线可显著抑制人脑 胶质瘤 A172、U251 细胞的迁移能力。3、TAM 联合 X 射线照射作用脑胶质瘤细 胞时，细胞克隆存活率随照射剂量的增加而减少（p＜0.01），多靶单击模型拟合剂 量存活曲线，A172 细胞单纯照射组的平均致死剂量（D0）和准阈剂量（Dq）分别 2.46Gy 和 2.97Gy，照射+TAM 组的 D0 和 Dq 分别为 1.97Gy 和 2.80Gy，A172 细胞 的放射增敏比（SER）为 1.25；U251 细胞单纯照射组的 D0 和 Dq 分别为 2.60Gy 和 0.91Gy，照射+TAM 组的 D0 和 Dq 分别为 1.78Gy 和 1.34Gy，U251 细胞的放射增 敏比（SER）为 1.46。4、TAM 联合 X 射线使人脑胶质瘤 A172、U251 细胞发生 G2/M 期阻滞且不可逆转。5、TAM 联合 X 射线可显著增加人脑胶质瘤 A172、U251 细胞的凋亡率（p＜0.01）。 6、western-blot 结果显示，TAM 联合 X 射线作用脑胶 质瘤 A172、U251 细胞能显著抑制 PKCι 和 Cdk7 的活性，周期蛋白 cyclinB1 的表 达减少，而凋亡蛋白 Bad 的表达明显增加，caspase3 的活性增加，PARP 的活性降 I 中文摘要 蛋白激酶 C 抑制剂 TAM 对人脑胶质瘤细胞辐射敏感性的影响及其作用机制的研究 低。（二）体内试验：1、构建原位脑胶质瘤