英文翻译抗血栓药氯吡格雷的化学酶合成方法研讨.docVIP

抗血栓药氯吡格雷的化学酶合成方法 摘要： L-邻氯苯甘氨酸经确认是已知的抗血栓药氯吡格雷中结构的一部分。我们准备通过酶催化光学纯手性砌块拆分邻氯苯甘氯酸甲酯。最好的结果就是通过固定化枯草杆菌蛋白酶,酶交联聚合获得碱性蛋白酶。高的对映体过量合成子保持不变的氯吡格雷合成，简单的过程使这个途径适合大规模生产。 1．介绍 氯吡格雷是一种抗血小板聚集和抗血栓形成的药物，减少动脉粥样硬化事件的管理包括心肌梗死、缺血性中风和周围性血管疾病,广泛用于血管内支架布局后结合阿司匹林。 在两个可能的立体异构体中,只有(S)型对映体适用于制药应用中,因为(R)型对映体是缺乏抗血栓形成的活性,并在实验中导致动物抽搐。邻氯苯甘氨酸（S）型是一个非天然的氨基酸且在市场上销售的外消旋混合物，是一种有价值的合成氯吡格雷的中间体，立体中心与取代基的两个分子严格相??。 几种(S)型的合成法来自于解决拆分(RS)邻氯苯甘氨酸,或其酯类,通过与酒石酸的形成非对映的盐或樟脑磺酸分步结晶。 另外，准备工作在经济上更不合适,因为50%的最终产品必须被丢弃，推迟这项拆分到最后一步,也就是说,结晶(RS)氯吡格雷与(1R)樟脑磺酸,或其前体与(2R,3R)酒石酸的结晶推迟。 苯甲基的质子的存在使得芳基甘氨酰胺外消旋化倾向:温和的条件和酶的立体选择性转换促使我们尝试生物催化的方法以便获得光学纯的邻氯苯甘氨酸与所需的结构。虽然很多成功的例子关于酶催化苯基甘氨酸已经在文献上报道，只有少数关于邻氯苯甘氨酸的案例被描述。苯基甘氨酸和一些类似物,不同的取代芳环,包括邻氯苯甘氨酸可作为半合成青霉素和头孢菌素的原料，已经准备采用D乙内酰脲酶。(RS)型邻氯苯甘氨酸已经成功地被Fadnavis等人通过固定化青霉素G酰基酰化酶解决。 2．结果与讨论 2.1酶催化RS型邻氯苯甘氨酸的拆分 首先,我们计划去探讨生物阴极转换羧基或氨基的可能性,即酶催化水解或合成酯3和酰胺4。 表1 酶法水解(RS)3 1.高效液相色谱法计算。 2.酸的结构得到光学纯的分配与高效液相色谱法相比(S)2和(S)3(见下文)。 3.(S)结构属于未反应的酯3。 方案1：枯草杆菌蛋白酶水解(RS)6。 表2 酶法水解(RS)6 1.由高效液相色谱C18固定相而定。 2.由叔丁氧羰基切除后高效液相色谱手性固定相而定。 3.酸5的结构被指定,与文献的D值相比，6被酯化。 我们从脂肪酶筛选开始,同时考虑到稳定的性能、选择性和可大规模生产的工业效用。然而,尽管宽类底物的选择性,包括氨基酸,只有低ee(0-25%)后得到邻氯苯甘氨酸甲酯3水解,从不同的起源利用脂肪酶。(从猪胰脂肪酶,PPL,从假单胞菌发射光谱,PFL,从圆柱假丝酵母,从南极假丝酵母,CAL B) 添加一个离子液体1-丁基3-甲基咪唑四氟硼酸盐，选择苯基甘氨酸, 并没有提高对映体纯度。在其他的水解酶中,只有胰凝乳蛋白酶提供一个满意结果。酸(S)2 ee停滞在40%~67%,当改进反应条件时,状况却得不到改善。一家韩国集团最近获得一项专利用碱性蛋白酶催化解决邻氯苯甘氨酸甲酯, 但是,枯草杆菌蛋白酶(从枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或嘉士伯方案1),在我们的手中,只提供部分浓缩(S)3(23 - 27% ee)。值得注意的是,在这种情况下,普遍(S)异构体是未反应的酯。(见表1,条目10,11)。这个事实可以解释的观测报告,枯草杆菌蛋白酶的催化部位排向脂肪酶的催化的镜像站点。 CALA和B可以酰化(RS)邻氯苯甘氨酸甲酯3到4a或4b在有机溶剂中,但是,正如报告中苯基甘氨酸甲酯随着PPL和PFL，他们的行动是没有选择性的。从蜂蜜曲霉酰基转移酶,到链霉菌属不能识别N乙酰衍生物作为衬底，N三氟乙酰基由4变成2，收益率变低（24小时后变为10%),没有立体选择性。这些初步结果促使我们处理甲酯筛选,选择容易移动的(TFA治疗)逆转录酶叔丁基羰基组。从脂酶检测,只有PPL显示非常低的活动,改变叔丁氧羰基甲酯，由6到5羧酸收益变低。胰凝乳蛋白酶,这是一个更有前途的酶，在无保护的情况下甲酯3没有改变叔丁氧羰基衍生物6，甚至在4天之后。 方案2 试剂与条件： (i) CH3OH, DCC, DMAP, CH2Cl2; (ii) TFA, CH2Cl2; (iii) 20% NH4OH; (iv) TsCl, (iPr)2O, Et3N; (v) NaHCO3, KI, CH3CN; (vi) paraformaldehyde,ClCH2CH2Cl, HCl in DMF 表3 高效液相色谱条件 1.检测器波长对所有化合物被设定在220纳米,除了9(250纳米)。 2.流量为1毫升/分钟,除了9(0.7毫升/分钟)。 3.每个样本注入的10微升。 这些令人满意结果与Arosio等