酶催化反应研讨.ppt

酶催化反应; 酶是具有高度选择性的催化剂，而一般情况下的酶反应均是在温和条件下进行的（如常温、常压和中性溶液），酶的这些特性使酶能在食品、饮料和诊断工业中广泛应用。 同样这些特性使酶能在各种化合物的合成，尤其是在药物、手性中间体、特殊的聚合物和生化物质合成中显示出了潜在的吸引力。 酶作为一种特殊的催化剂正越来越受到人们的重视，对其应用研究也更趋广泛，从生物体系的酶到非生物体系的酶催化，从酶的固定化到非水相酶反应，酶的潜在能力正获得越来越多的开发和利用。;7.1.1 酶和细胞的固定化方法;7.1.1 酶和细胞的固定化方法;;1） 吸附法（最古老、最简便经济）;吸附剂的种类（1）：;◆离子交换剂（目前最常用）：羧甲基纤维素、DEAE-纤维素、DEAE-葡聚糖以及合成的离子交换剂等 作用原理：静电吸引 缺点：当离???强度增加或者介质的pH、温度改变时，这种结合发生分解。如果通过化学方法增加酶蛋白上的电荷则可使这些影响得到改善。 第一个用于工业生产的固定化酶：固定化氨基酰化酶——将氨基酰化酶吸附在DEAE-纤维素或DEAE-葡聚糖上制得。 ;吸附剂的种类（3）：;2） 包埋法（普适性）;载体（1）：格子型包埋法载体;★海藻酸盐：价格便宜、来源丰富，无毒性，目前应用较广 特点： △操作简便、条件温和 △在高浓度的电介质（K+、Na+等）溶液中，固定化颗粒会不稳定； △Ca 2+等多价离子在磷酸缓冲液中会沉淀，固定化颗粒的机械强度将降低，最后重新溶解。因此用此法包埋的固定化酶或细胞不能用于磷酸缓冲溶液中。;一般操作方法： 先将海藻酸盐溶于水中，使其具有一定粘度； 然后加入一定量的细胞菌体，并且充分搅拌，使之分散均匀； 通过注射器或毛细管将此菌体悬浮液逐滴注入含有Ca 2+、Zn 2+、Al 3+等多价离子的溶液中，由于离子转移的胶凝作用，海藻酸盐液滴便形成珠状的固定化细胞颗粒。 待颗粒经过一定时间的硬化后洗净，即可用于催化反应。;★聚丙烯酰胺凝胶：蛋白质的固定量较高，可达10~100mg/g单体，目前常用的聚合物载体 特点： △聚丙烯酰胺凝胶中孔的大小分布很不均匀，因此要防止酶的漏失。 △调节单体和交联剂的用量可以改善聚丙烯酰胺凝胶的渗透性。;操作方法： 在含酶（或细胞）的水溶液中，加入一定比例的单体丙烯酰胺和交联剂N，N’-甲撑双丙烯酰胺； 然后在催化剂（二甲氨基丙腈）和引发剂（过硫酸钾）的作用下低温（水浴）聚合； 产生的聚合物凝胶便是固定化酶，可通过机械方法分散成一定大小的粒子。;载体（2）：微胶囊包埋材料; 3） 交联法;★双功能基团试剂与酶蛋白的交联作用，常引起蛋白质高级结构的改变，使酶失活。 ★常在被交联的酶蛋白溶液中添加一定量的辅助蛋白，避免或减少酶在交联过程中因化学修饰造成的失活。如牛血清蛋白和明胶等蛋白的加入往往能提高固定化酶的稳定性。;4） 化学共价法;共价偶联反应的选择： ■酶蛋白上 供共价结合的功能基团必须不影响酶的催化活性 ■反应条件尽可能温和 ■最好能在水溶液中进行反应 ■偶联反应对酶蛋白上某一类功能基团有很高的专一性，而对其他功能基团或水溶液几乎无副反应。;7.1.2 酶催化反应的应用实例;2）酶催化研究的新动态;7.2 微生物转化;微生物转化与化学过程相比的优点：;微生物转化的发展：;7.2.1 微生物转化一般过程;7.2.2 培养系统类型;7.2.2 培养系统类型;7.2.2 培养系统类型;7.2.2 培养系统类型;7.2.3 底物加入;7.2.4 微生物转化的类型;7.2.5 微生物转化的应用;7.3 非水相酶催化;7.3.1 非水相酶催化的特性;7.3.2 非水相酶催化的相关问题;7.3.2 非水相酶催化的相关问题;7.3.3 非水相酶催化的应用;第七章习题 1.酶和细胞的固定化方法 2.微生物转化一般过程 3.非水相酶催化的特性