07微生物限度检查法3总汇.ppt

微生物限度检查法;定义：微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染的程度。 检验项目:细菌数、霉菌及酵母菌数检查 控制菌检查 微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。;细菌及控制菌培养温度为30～35℃。 霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃。 结果报告：以1g、1ml、10g、10ml 或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。 ;稀释剂：;供试液制备;;3.特殊供试液制备方法 （1）非水溶性供试品 　　①取供试品5g(或5ml),加入含司盘80 5g、单硬脂酸甘油酯3g、聚山梨酯80 10g的无菌溶化混合物（温度低于45℃）的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃左右的稀释剂至100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1：20供试液（无抑菌作用）。;;Date;Date;;（3）肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10g，加稀释剂至100ml，置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1：10供试液 肠溶制剂供试品 ：用pH6.8无菌磷酸盐缓冲液溶解。 结肠溶制剂供试品 ：用pH7.6无菌磷酸盐缓冲液溶解。 ; ;（6）贴剂供试品 取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴 在一起。然后将其置于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯 80 或卵磷脂） 的稀释剂中，用力振荡至少 30 分钟，制成供试液。贴剂也可以其他适宜的方法 制备成供试液。 ;供试液制备注意;细菌、霉菌及酵母菌计数;1.平皿法;阴性对照试验 取试验用的稀释剂1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。 ;Date;Date;培养和计数;Date;Date;Date;Date; 含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵母菌数，合并计数。 ;。。一般情况下，营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果。;菌数报告规则;（5）具抑菌活性的供试品 当供试品有抑菌活性时，应消除其抑菌活性后，再依法检查。常用的方法有：(1) 培养基量稀释法 (2)低速离心沉淀 (3)薄膜过滤法 (4)中和法（磺胺类加对氨基苯甲酸）;Date;2.薄膜过滤法;Date;Date;Date;Date;Date;Date;Date;阴性对照试验 取试验用的稀释剂1ml同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。 培养和计数 同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不多于100个。;菌数报告规则;制药用水微生物限度检查方法;纯化水：微生物限度 取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查（附录Ⅺ J），细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。例：某生物技术有限公司生产的纯化水，分别吸取1ml，经薄膜过滤处理，取滤膜依法检查，细菌数不可计；霉菌和酵母菌数1ml小于1个。同时吸取10ml纯化水，加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲溶液稀释至100ml，取1ml???膜过滤，细菌数150个/ml（滤膜上有15cfu）。结果细菌、霉菌和酵母菌总数150个/ml，不符合规定。;Date;控制菌检查;控制菌检查检查法;菌液制备; 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养 5～7 天，加入 3～5ml 含 0.05％（v/v）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％（v/v）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子数 50～100cfu 的孢子悬液。 菌悬液在室温下放置应在 2 小时内使用，若保存在 2～8℃可在 24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～8℃，在验证过的贮存期内使用。 ;结果判断;结果判断;结果判断;Date;Date;Date;谢谢！