9. 基因表达调控.pptxVIP

基因转录水平调控Regulation of eukaryotic gene expression;本节主要内容;第一节 基因表达调控基本形式;;真核基因组的复杂性;真核生物DNA水平上的基因表达调控;一、染色质结构对真核基因转录的调控;1. 染色质结构影响基因转录; 真核基因的活跃转录是在常染色质上进行的。转录发生之前，染色质常会在特定的区域被节选松弛，形成自由DNA。 这种变化可能包括核小体结构的消除或改变，DNA本身局部结构的变化，从右旋型变成左旋型（Z-DNA）等，这些变化可导致结构基因暴露，促进转录因子与启动区DNA的结合，诱发基因转录。;四种组蛋白(H2A、H2B、H3、H4)各2分子组成八聚体的小圆盘 → DNA缠绕 → H1组蛋白;当启动子区形成了核小体时，转录因子和RNA聚合酶不能与之结合。 当转录因子和RNA聚合酶与启动子结合后，组蛋白不能与启动子DNA结合。;3. 组蛋白;组蛋白的修饰：; 组蛋白修饰影响染色质的结构和功能； 多数修饰位点是单一、特异的修饰。但有些位点可能有一种以上的修饰。每种功能可能与修饰相联系。; 真核DNA中的胞嘧啶约有5%被甲基化成5-甲基胞嘧啶(5-methylcytidine, 5-mC)，而活跃转录的DNA段落中胞嘧啶甲基化程度常较低。 主要甲基化形式5-甲基胞嘧啶（5-mC），少量的N6-甲基腺嘌呤（N6-mA）和7-甲基鸟嘌呤（7-mG）。 甲基化可使基因失活，去甲基化又可使基因恢复活性。 DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。;真核基因转录水平的调控;一、顺式作用元件（cis acting elements）;二、反式作用因子（trans acting factors）;转录调控方式;转录因子活性调节的主要方式;（二）转录因子的结构特征 – 蛋白质和DNA相互作用;;The key steps in transcription;General strategies for studying transcription factors;1. Identification of regulatory DNA elements required for efficient expression of a particular gene;1. Identification of regulatory DNA elements required for efficient expression of a particular gene;Identification of regulatory DNA elements required for efficient expression of a particular gene;Identification of regulatory DNA elements required for efficient expression of a particular gene;1. Identification of regulatory DNA elements required for efficient expression of a particular gene;;Sample of a DNAse I footprinting gel (for a DNA-binding protein).;End-label DNA fragment. Bind protein. Treat with dimethylsulfate, which methylates purine bases. Partially cleave DNA by depurinating the methylated bases (piperidine) Separate DNA fragments on DNA sequencing gels. ;Sample of DMS footprinting.;2. Identification of proteins interacting with a particular regulatory DNA element;Utilization of EMSA;2. Identification of proteins interacting with a particular regulatory DNA element;2. Identification of proteins interacting with a particular regulatory DNA element;2. Identif