传染病病原体的诊断详解.ppt

传染病病原体的诊断技术;;;1973年以来部分新发的传染病;1973年以来部分新发的传染病(续);大部分人类致命性疾病均是由动物传播，包括现正肆虐全球的禽流感。 每年至少有一种新病原体，包括病毒、细菌、寄生虫、原生动物和真菌等从动物传染给人类。 前所未有的速度产生突变，并传给人类，就如艾滋病、马尔堡出血热、SARS以及现正肆虐全球的禽流感等难抗病毒。 研究人员分辨1407种令人类生病的病原体，发现其中至少800种越过种物界线，由动物传至人类。 ;与人类行为及环境的改变有关;新病原体的特征;人类与传染病较量中的四方面重大突破;快速诊断是关键;传染病的实验室诊断;传统的和常规的病原学诊断;Electronmicrographs;免疫荧光检测;细胞病变效应 (cpe);实 验 动 物;核酸诊断的发展史;核酸分子杂交(nucleic acid molecula hybridization);常用核酸??子杂交技术;聚合酶链反应（PCR） ;PCR原理和步骤;定量PCR---荧光实时定量PCR;新发传染病的病原体？？？;病原学发现的“科赫三定律”; ;基本思路;已知病原体的快速诊断;高通量的病原体筛选技术;Multiplex PCR-Mass Tag system;美国哥伦比亚大学Lipkin 研究组发明了一种基于multiplex PCR-MassTag（多重PCR与质谱联用）的高通量病原体快速筛选技术。 优点：由于使用光敏感的分子量标签，增强了multiplex PCR引物设计的适应性和灵活性，使检测通量有大幅度的提高。应用质谱分析PCR产物上的分子量标签克服了凝胶电泳分辨率的局限或荧光染料种类的局限。;1. PCR amplification with conjugated primers 90 minutes;NUCLEIC ACID CONJUGATED MASS TAGS;DETECTION OF 58 DIFFERENT MASS TAGS BY APCI-MS;目前，建立在此技术上的有呼吸道病原体检测模块（包括19个病毒和3种细菌），流感病毒亚型检测模块，出血热病原体检测模块，痘疹病毒检测模块和脑炎脑膜炎病原体检测模块。尽管目前已开发的分子量标签只有64个，但根据质谱分析的分子量范围，还可有极大的拓展空间，保证了这一技术具有足够的发展前景和潜力。 ;RESPIRATORY SYNDROME PANEL;HEMORRHAGIC FEVER PANEL;;Multiplex PCR-XMAP;Diagram;Super Primer;Templex? PCR技术原理;巢示PCR引物提高了引物间的相容性 低浓度的特异性引物降低了反应过程中的背景值. 仅有的一条生物素标记的引物使得更容易扩大生产以及质量控制.;流式荧光技术（液芯）原理——XMAP;;共价交联技术;反应模式;Multiplex Assays with Color Separetion;Luminex 100多功能流式点阵仪; 呼吸道感染Ⅰ型11种DNA基因组的病原体;呼吸道感染Ⅱ型13种RNA基因组病毒型病原体;蛋 白 质 芯 片;一. 基本原理 微小的乳胶颗粒（Beads,微球）分别染成不同的荧光色，然后再把针对不同检测物的蛋白（如抗原抗体）以共价方式结合到特定颜色的微球上。应用时，先把针对不同检测物的、用不同颜色编码的微球混合，再加入被检测物（被测物可以是血清中的抗原、抗体、或酶等）。;固定生物分子的微球;悬浮点阵;The Red Laser is Used to Identify the Bead Code; 液相芯片的特点：??? 液相芯片的独特设计使得它拥有常规的蛋白质检测方法所不具备的特点： 1. 重复性好 2. 通量大 可对同一样本中的多种不同目的分子同时进行分析在35-60分钟内可对96个不同样本进行检测 。;? 3. 灵活性好 4. 灵敏度高 5. 信噪比好 6. 操作简便，不需洗涤，耗时短? 7.液相环境更有利于保持蛋白质的 天然构象，也更有利于探针和被 检测物的反应 ; Hybridization Time; MASATM和ELISA灵敏度的比较;基因芯片（Gene Chip） ;Viral Pathogen Custom Microarray;;High Sensitivity S