在hSOD1G93A转基因小鼠中Nrf2对ATF4蛋白表达影响研究.pdfVIP

在?????;?蛐∈笾蠳??訟??泶镉跋斓难芯????邱??细胞凋亡。内质网膜表面存在三种跨膜蛋白，分别为???Ⅺ???摘要目的：肌萎缩侧索硬化???????????珹??窃硕??经元病中最常见的类型，该病的特点是上下运动神经元变性，上运动神经元受累表现为痉挛、构音障碍和吞咽困难等；下运动神经元受累表现为肌肉萎缩、肌束颤动等。大约?％的肌萎缩侧索硬化病例为散发性???????瑂??，?％为家族性肌萎缩侧索硬化???????琭??。??的??病例与突变的铜锌超氧化物歧化酶???／??琒??有关。其中以突变的??位点最常见，即基因密码子第?位点上的丙氨酸被甘氨酸替代。????转基因小鼠表现为进行性加重的运动神经元变性，与人类运动神经元病相似，是国际上公认研究???动物模型。用转染了人类突变的???????，????淖;??小鼠进行实验研究，发现???通过很多途径损害运动神经元，例如：氧化应激反应、错误折叠／未折叠蛋白聚集、线粒体功能受损、谷氨酸兴奋毒性等。近年来许多学者提出了内质网应激学说。内质网是一个多功能细胞器，它是蛋白质的合成、加工处理和折叠的场所，也是钙离子的储存库。当钙离子平衡紊乱或错误折叠／未折叠蛋白在内质网腔内积聚时就可以诱发内质网应激，紧接着触发未折叠蛋白反应来辅助蛋白质折叠以减轻内质网应激。适当的内质网应激可以起到细胞保护功能，但细胞中发生过度的内质网应激则可以引起细胞功能障碍，甚至?和???。当发生??保?饧钢值鞍追直鹩肽谥释?系姆肿影槁翯??分离而被激活，激活的蛋白分别介导三条通路。??通路是三条通路中最早被激活的，??与???掷牒笸ü?自身的二聚化和磷酸化而被激活，磷酸化的??????筫???位丝氨酸发生磷酸化，从而使蛋白质的合成减缓或者停止。磷酸化的???????せ預????餎?????????鞍妆泶锏脑?中文摘要?????????????????????????????—?????? 并以此为研究对象，使用免疫组织化学及激光共聚焦方法研究不同时期运动神经元数目及??表达部位变化情况，通过免疫印迹方法研究??鼠粮喂养。动物实验的过程遵守河北省实验室动物管理规定。实验所用小多，???负反馈性的调节???牧姿峄?Ａ姿峄?腜??诩せ????耐?币彩筃?????????掷氩⒒罨??罨?腘?谟上赴??R频较赴?耍?⑿枰T贏??的协同作用下上调二相解毒酶的表达，从而促进细胞存活。??????热搜芯勘砻鱡??上调?陌?姆?耄?鳱?甪????的转录。??和??相互结合后与一些二相解毒酶基因上的??蛄薪岷希?系鞫?嘟舛久傅谋泶铮?源说鹘谙赴?难趸?乖?平衡，维持细胞内环境稳态。本实验通过与??．／??笤咏恢票盖贸齆??膆?????∈螅?在不同时期小鼠的变化情况及??对其表达的影响情况。方法：动物模型的饲养及鉴定所有小鼠均饲养在?????????肪持校?春闶!⒑?温?????以及无特定病原菌的环境，以无菌水、及灭菌的??犊帕?鼠均从美?????笛槭????????琔??蚪?＝玈????;??小鼠与??．／．小鼠杂交，制备??敲除的????转基因小鼠。采用剪取子代小鼠尾尖的方法获取子代小鼠的????肞?扩增技术，鉴定是否带有??及????基因。?庖哂〖?按照???的评分标准将实验小鼠分为症状前期组?分，约出生后?天?⒅⒆丛缙谧??郑?汲錾????和终末期组?分，约出生后???，每组均设立同窝同性别同年龄对照。新鲜获取小鼠腰髓，保存于一?。??浔赣谩２捎贸樘崃呀夥ㄌ崛〉鞍祝?ü齱?????方法测定??在??????转基因小鼠不同时期的表达并在终末期小鼠中研究敲除??对??表达的影响。免疫组化将??????转基因小鼠分为三组?⒆辞捌凇⒅⒆丛缙诤椭漳?期??孔榫?枇⑼?淹?员鹜?炅涠哉铡Ｓ枚嗑奂兹┕潭ㄐ∈蟮难?琛?中文摘要?与调??????????????? 覱．???谥⒆丛缙诿飨陨?哔琌．???漳┢谟兴?陆?尸?．???结论：????转基因小鼠存在内质网应激，??表达随病程进展振荡切片后，保存于?姹赣谩＝?∈笱?杞?蠥??庖咦榛?旧ā??す夤簿劢?腰髓标本经?ザ嗑奂兹┕潭ê螅?谜穸?衅??谐???竦谋∑??与免疫组化步骤相似，一抗孵育后，??、??直鸨昙茄蚩雇谩⒀蚩故?二抗。并?????核荧光染色剂孵育后，抗衰减荧光淬灭剂封片，激光共聚焦显微镜观察抗体分布位置，探讨??对??表达部位的影响。结果：免疫印迹方法观察??在转基因小鼠的表达量，发现对照组小鼠表达量较少，且在???天之间随年龄的增长无明显差异性。在??????小鼠的腰髓中，??的表达在症状前期就有所升高??在??????终末期小鼠的表达比在??．／一??终末期小鼠显著升高??．??Ｃ庖咦榛?峁?允舅孀偶膊〉慕?乖硕?窬?O赴??鸾?减少，且组织出现空泡化，??的表达在症状