Polι在食管鳞癌中过表达机制和其对放化疗敏感性影响的研究.pdf

Pol ι 在食管鳞癌中过表达机制及其对放化疗敏感性影响的研究 中文摘要 Pol ι 在食管鳞癌中过表达机制及其对 放化疗敏感性影响的研究 中文摘要 第一部分：跨损伤 DNA 合成通路基因在食管鳞癌组织中的表达 目的 研究跨损伤 DNA 合成(translesion DNA synthesis, TLS)通路基因在食管鳞 癌组织与正常组织中的差异表达情况。 方法 在 mRNA 水平采用高通量 real-time PCR 筛选食管鳞癌/正常组织中显著差 异表达的 TLS 通路基因；在蛋白水平采用免疫组织化学方法检测食管鳞癌组织 DNA 聚合酶 ι (DNA polymerase iota, Pol ι)的表达。 结果 real-time PCR 结果表明，与正常组织相比，TLS 通路基因中 REV3L、 REV7L、RAD18、DNA 聚合酶 κ (DNA polymerase kappa, Pol κ)和 Pol ι 等基因 mRNA 表达水平在食管鳞癌组织中显著上调，其中 Pol ι mRNA 表达量上调 7.2 倍；相对应 地，免疫组织化学结果表明 Pol ι 蛋白在食管鳞癌组织中亦存在高水平的表达。 结论 TLS 通路中的关键基因 REV3L、REV7L、RAD18、Pol κ 和 Pol ι 在食管鳞 癌组织中的表达明显高于正常组织，食管鳞癌组织中 TLS 通路基因特别是 Pol ι 基因 的 mRNA 表达上调是食管鳞癌癌变的标志之一。 第二部分：Pol ι 在食管鳞癌组织中过表达的机制 目的 从 DNA 甲基化、组蛋白乙酰化和转录因子结合多个角度探讨食管鳞癌组 织与正常组织中 Pol ι 基因 mRNA 表达差异的机制。 方法 (1) 采用亚硫酸盐测序法检测食管鳞癌组织和正常组织中 Pol ι 基因启动 子区 CpG 位点的甲基化情况；(2) 采用 DNA 甲基化转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化 酶抑制剂处理食管癌细胞株 Eca-109 和 TE-1，观察 DNA 甲基化和组蛋白乙酰化对食 管癌细胞中 Pol ι 基因 mRNA 表达的影响；(3) 构建 Pol ι 调控荧光素酶报告基因的重 组体，转染食管癌细胞 Eca-109 和 TE-1，以荧光素酶活性大小反映不同长度启动子 I 中文摘要 Pol ι 在食管鳞癌中过表达机制及其对放化疗敏感性影响的研究 对于 Pol ι 基因转录效率的影响；将上述重组体与 Sp1 及 Oct-1 转录因子表达质粒共 转染，检测转录因子是否具有激活作用；采用 real-time PCR 方法检测食管鳞癌组织 与正常组织 Pol ι 基因与 Sp1、Oct-1 基因的 mRNA 表达是否具有相关性；染色质免疫 共沉淀(chromatin Immunoprecipitation, ChIP)分析 Eca-109、TE-1 细胞和食管鳞癌组织 中转录因子 Sp1、Oct-1 和 RNA 聚合酶 II 与 Pol ι 基因启动子区特异位点的结合水平。 结果 (1) 与正常组织相比，食管鳞癌组织 Pol ι 基因启动子区 14 个 CpG 位点的 甲基化水平基本无差异；(2) DNA 甲基转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理 未改变 Eca-109 和 TE-1 细胞中 Pol ι 基因 mRNA 的表达水平；(3) 重组体转染试验表 明，与转染