MT1MMP基因缺失对诱导性多能干细胞的增殖能力和其向内皮细胞分化的影响.pdf

目录一、摘要中文论著摘要??????????????????????????英文论著摘要??????????????????????????二、英文缩略语???????????????????????????三、论文前言??????????????????????????????材料与方法???????????????????????????实验结果????????????????????????????讨论??????????????????????????????结论??????????????????????????????四、本研究创新性的自我评价?????????????????????五、参考文献????????????????????????????六、附录综述??????????????????????????????致谢??????????????????????????????个人简介????????????????????????????舄?帷????????????????????????????? 甅?基因缺失对诱导性多能干细胞的增殖能力及其向内皮细胞分化的影响目的??面同胚胎干细胞?????活·中文论著摘要·???珽??及其相似。??赴?捎诰哂杏隕??胞，并对其增殖、粘附、凋亡和向内皮细胞分化功能进行检测和分析，探讨乃小鼠和??甅?基因敲除小鼠的成纤维细胞以密度???痬?赴??又钟?细胞各种功能的实现依赖于细胞外微环境提供的各种条件和刺激信号。细胞外基质??????????，??是细胞外微环境的主要成分，包括一些生长因子和酶类。基质金属蛋白酶?????????????，???窍赴?庖淮?类基质降解酶。膜型基质金属蛋白酶??????????甅??是一种膜锚定型基质金属蛋白酶，活化后的??甅?能够降解细胞外基质成分，包括???廷蠼涸?⑾肆?鞍住⑾宋?鞍椎龋?⑶一共斡胙9?形成，介导基质金属蛋白酶???????????的活化等作用。将??、????、?甅?和Ⅺ?四种外源性表达的转录因子转染至成纤维细胞中，使其重编程为具有胚胎干细胞样状态的诱导多能干细胞???????。此类细胞在克隆形态、生长特性、基因表达和分化潜能等方一样的优势和分化特性，且可以避免免疫原性、伦理问题等的限制，故在细胞替代治疗及再生医学等临床治疗上具有有良好的应用前景。本实验通过将??、??、?狹?和??四种外源性表达的转录因子转染至?????蚆?一???蚯贸?蟮某上宋?赴?校?蛊渲乇喑涛S盏级嗄芨上???甅?基因缺失后对??赴?脑鲋澈拖蚰谄は赴?只?δ艿挠跋臁????细胞的制备和鉴定：将??．??／?ⅲ甋??ⅲ甤．??鸵虎鹒?闹种?粒在大肠杆菌扩增、提取；??．?赴?蛋?芭嘌?⑹占?锨逡海惶崛???／????呐嘌?笾校?尤雙??狾???、．??、???和．??四种质粒包装成????????????，??????????琲? 结果???细胞的制备与鉴定???．???蛉笔Ф詉?细胞的增殖功能的影响接种到铺有??赴?呐嘌?笾校?籼旎灰骸Ｔ诠庋У怪孟晕⒕迪鹿鄄熳H竞蟮?克隆形成情况，挑取克隆，传代培养，观察??赴?男翁??钚粤姿崦溉旧ǚ??在半固体???上形成微管腔结构的能力。将???置于??融化，?孔板每孔病毒的上清液，放入?。??％??ズ褪6忍跫?屡嘌??刻旎灰阂淮危?教旌?定???庖哂ü饧觳鈏?细胞的?细胞特异性标志??．?癘???的表达。???法检测增殖用??约梁屑觳饬街謎?细胞的增殖情况。?⑾赴?掣郊觳饨?街謎?细胞以相同起始密度铺于培养盘中，放至?。?????饱和湿度条件下培养，每隔???〕鲆蛔橄赴???ド锨搴笥肕?试剂盒处理并用光学倒置显微镜观察拍照。????法检测细胞凋亡用???赴?蛲鍪约梁屑觳饬街窒赴?牡蛲銮?况，并在光学倒置显微镜下拍照。???一???蚯贸?∈骾?和?????∈骾?细胞的诱导分化及体外微管腔形成分别将两种细胞的密度调整为????捉又钟??装逯校?幽谄?细胞诱导分化培养基，置于?℃、???饱和湿度条件下培养，每隔?换一次新鲜诱导液，连续培养?。用体外血管生成试剂盒，观察诱导分化?后的细胞铺??????，将诱导?的两种??赴?????觯?椎南赴?芏冉又种涟牍烫????上，?℃、???饱和湿度条件下孵育?，于光学倒置显微镜下观察拍照。??赴?翁?Ч鄄熳H玖薕??????．??蚄??闹肿B家蜃拥??????蚆?．???蚯贸?某上宋?赴??剂街芎笮纬上赴?寺。?羧】?隆，传代培养后可见?样细胞克隆形式。??钚粤姿崦溉旧?眉钚粤姿崦甘约梁卸源ù?罅街謎?细胞进行染色，稳定转染后的细胞呈蓝紫色。??庖哂ü馊旧?街謎?细胞明显表达?细胞的特异性抗体??．????／???’ 。关键词结论???一???蛉笔Ф詉?细胞的粘附功能的