分子生物学3.7.ppt

本章主要内容：;本节主要内容;3.7.1 RNA中的内含子;;;3.7.2 真核生物tRNA前体的转录后加工;3.7.2 真核生物tRNA前体的转录后加工;tRNA内含子的特点;真核生物tRNA转录后加工;真核生物tRNA转录后加工;真核生物tRNA转录后加工;真核生物tRNA转录后加工; 3.7.3 真核生物rRNA前体的转录后加工; 3.7.3 真核生物rRNA前体的转录后加工; 3.7.4 mRNA的剪接 (Splicing);5’加“帽”和 3’酶切加多聚腺苷酸;;;真核基因平均含有8-10个内含子，前体分子一般比成熟mRNA大4-10倍。;比较同源基因的进化过程发现内含子的异化大于外显子,特定的内含子还可能在进化过程中丢失,因此,内含子的“功能”及其在生物进化中的地位是一个引人注目的问题。; 例如： 地中海贫血病人的珠蛋白基因中，大约有1/4的核苷酸突变发生在内含子的5’或3’边界保守序列上，或者直接干扰了前体mRNA的正常剪接。;; 断裂基因发现不久，Crick（1978年）就提出了一系列发人深思的问题：; Chambon等分析比较了大量结构基因的内含子切割位点，发现有2个特点：; GU-AG法则（GU-AG rule）不适用于线粒体、叶绿体的内含子，也不适用于酵母的tRNA基因 。;?脊椎动物前体mRNA中常见内含子剪接所必需的保守序列;除了边界序列之外，外显子与内含子交界处的序列，内含子内部的部分序列都有可能参与内含子的剪接。;核mRNA结构特点;核mRNA的剪接;细胞核中的小分子RNA称为细胞核小RNA（small nuclear RNA, snRNA); 位于细胞质中的称为细胞质小RNA (small cytoplasmic RNA, scRNA)。 在自然状态下，它们以核糖核蛋白颗粒（SnRNP和scRNP）的形式存在，俗称snurps和scyrps。 在核仁中也存在着一类小的RNA，称为核仁小RNA (small nucleolar RNA, snoRNA),它们在rRNA的加工中起作用。 snRNA参与剪接过程，并与其它蛋白一起构成一个大的颗粒复合体,称为剪接体(splicesome)。;; 由U1 snRNA以碱基互补的方式识别mRNA前体5’剪接点，由结合在3’剪接点上 游富嘧啶区的U2AF（U2 auxiliary factor）识别3’剪接点并引导U2 snRNP与分支 点相结合，形成剪接前体（pre-spliceosome）。;RNA剪接中的两步转酯反应;RNA剪接中的两步转酯反应;哺乳动物细胞中mRNA前体上的snRNP是从5’向下游“扫描”，选择在分支点富??啶区3’下游的第一个AG作为剪接的3’受点。 AG前一位核苷酸可以影响剪接效率，一般说来，CAG=UAGAAGGAG。 如果mRNA前体上同时存在几个AG，可能发生剪接竞争。; 在高等真核生物个体发育或细胞分化过程中可以有选择性地越过某些外显子或某个剪接点进行变位剪接，产生出组织或发育阶段特异性mRNA。;Drosophila DSCAM gene can be spliced in 38,000 alternative ways ;Different ways of alternative splicing; Autosplicing (Self-splicing,自我剪接) describes the ability of an intron to excise itself from an RNA by a catalytic action that depends only on the sequence of RNA in the intron.;;自由鸟苷酸的3’-OH作为亲核基团攻击内含子5’端的磷酸二酯键，从上游切开RNA链。;和I类内含子剪接不同；和核mRNA 内含子的剪切有些相似，但也有不同之处。?;; Ⅱ类内含子的剪接无需鸟苷酸或鸟苷的辅助，但需镁离子的存在。 ;;;; The chemistry of group II intron splicing and RNA intermediates produced are the same as that of the nuclear pre-mRNA.;三类剪接反应都是通过两次连续的转酯反应进行的