野生型和缺失突变型HBx对肝细胞凋亡及microRNA表达谱的影响.pdf

喙豀?的发生发展中发挥重要的作用。皿?芡ü?嘀址绞?在争议，其确切机制尚不清楚。有研究显示皿?日、匕??俳?赴?蛲觯?前期的研究也显示，与野生型??啾龋?笔?槐湫汪瑇能明显促影响肝细胞的凋亡，研究发现??愿蜗赴?蛲龅牡鹘谑谴琕引起野生型与缺失突变型??愿蜗赴?蛲黾癿????泶?谱的影响摘要：研究背景肝细胞癌?????????????琀??鞘澜绶段?内最常见的恶性肿瘤之一，大量流行病学调查表明，长期慢性乙型肝炎病毒????????琀??腥臼堑贾翲?的主要病因。近年来研究发现乙型肝炎病毒??????????，??在??闹匾;?浦?唬?欢鳫?对肝细胞凋亡过程的调节作用仍存但是也有研究显示??种葡赴?蛲觥Ｓ腥さ氖牵?恍┭芯糠⑾衷???喙氐腍?组织中???虺３７⑸?笔В?绕涫囚然?说娜?失。??然?说娜笔Э赡芨谋淞艘吧?虷?在控制细胞增殖、分化、凋亡方面的作用，从而在??喙豀?中发挥重要作用。我们进肝细胞的恶性转化，但其具体的分子机制尚有待阐明。微小??????，???是一类在转录后水平调控基因表达的小分子???斡敕⒂?⑾赴?鲋场⒎只?⒌蛲龅榷嘀稚?镅?过程，在多种人类疾病包括肿瘤的发生中发挥着重要的作用。在肿瘤中???泶锏纳系骰蛳碌骺赡芷鸬桨┗?蚧蛞职┗?虻淖饔谩????? 最近研究表明???赡苡際?的发生与发展密切相关，但是???贖?相关??械淖饔没?粕胁皇?智宄??研究目的通过对野生型????和缺失突变型????．???婧吮泶镌靥遄H靖蜗赴?纳?镅?形!⑾赴?蛲龊?????表达谱的研究，探讨??際?．??对肝细胞凋亡及????表达的影响，以及这些变化在肝细胞恶性转化中的作用。研究方法??此辗直鸷琾????、???．?疕?及???．?疕?．??质粒的重组细菌?．?，提取质粒并用???双酶切法鉴定质粒，对质粒进行??庑虿⒂τ肈???????、????生物软件进行分析。??τ弥?侍遄H镜姆椒ǎ??质粒???．??????／???蚿????／??甦??H救隠?肝细胞中，用??筛选出稳定表达??虷?．??蛋白的肝细胞株。??梅畔呔?谼???????珹??、肿瘤坏死因子??琓?．?处理????／???．????疕?和??疕?甦??楦蜗赴??盏几蜗赴?蛲觥Ｓ媚ち5鞍???炝蚯杷嵊ü馑兀?饣????????瓼??疨?双染色流式细胞分析法检测并比较??、??猘处理?∈保??∈保??∈保??∈备髯楦?细胞凋亡情况；用终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标???????????琓????觳獠⒈冉螦????—????∈备髯楦蜗?胞凋亡情况：用?—????????????????????／????????，?????甪??????????????????? x??d382????????????????(2)Annexin?????蚖??????觳釲?、??痯????、??疕?和??疕?．??组肝细胞中????、??????????琍????和蛋白的表达。(4)????microRNA????????L02??pcDNA3??0??????????????究分析??甦??虷?转染??蜗赴?蟾蜗赴?趍??表达谱的变化。研究结果??な盗艘吧?虷????腿笔?槐湫虷???．???婧吮泶镌靥骞菇ㄕ?罚?⒊晒??⒘宋榷ū泶颒?V??FITC??PI??????????????????ActD??TNF-a????????L02??L02??pcDNA3??0??L02??HBx-d3????疕?组细胞早期凋亡率分别为?．?士???％、?．?士???％、?．?士???％、?????．??ィ籄????．?????笔盠?、L02??pcDNA3??0??L02??HBx??d3825??L02??HBx??????????????????????ActD??TNF-a??N24d,????L02??L02??pcDNA3??0??L02??HBx??d382??1]??疕?组细胞早期凋亡率分别为?????．??ァ??．?士???％、?????．??ァ??．??．??ィ籄????．?????笔盠?、L02??pcDNA3??0??L02??HBx-d382??11L02??HBx??????????????????????ActD??TNF-a????????????????L02??HBx??????????????????????L02??L02??pcDNA3??0??L02??HBx-d382N(p0??05)??????3????????????????????????????????????(p0??05)????ActD??TNF??a??????????deleted??????．?土???％、?．?士?????％、?．?士???％：(35??25-+