siRNA抑制HMGA1基因表达对LX2细胞生物学功能影响.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 探讨 HMGA1 siRNA 对人肝星状细胞 LX-2 中 HMGA1、a-SMA、E-cad 基 因的表达调控作用，及增殖活性的影响，并探讨其可能的机制。 方法： 1. 选择体外培养 LX-2 细胞作为研究对象，分别设立以下六组：①正常对 照组；②空白对照组；③阴性对照组；④转染 HMGA1- siRNA-1；⑤ 转染 HMGA1- siRNA-2；⑥转染 HMGA1- siRNA-3。转 染 48h 后收集各组细胞。采用 半定量 RT-PCR 检测和 Western blot 印迹法检测 HMGA1 的 mRNA 和蛋白表达， 筛选出干扰效果最佳的 siRNA 序列。 2. 选择体外培养 LX-2细胞作为研究对象，加入不同浓度的 TGF-β1（终浓 度1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml)孵育，并配对照组。于24h 后收集细胞，提取 LX-2 细胞总 RNA 及总蛋白。用半定量 RT-PCR 及 Western blot 印迹方法检测 TGF-β1 对 LX-2细胞 HMGA1的 mRNA 和蛋白表达的影响。 3. 采用脂质体转染法对 LX-2 细胞进行 HMGA1 siRNA 瞬时转染，将细胞 分为 4 组：①正常对照组、②TGF-β1 刺激组、③TGF-β1+ NC-siRNA 组和 ④TGF-β1+ HMGA1-siRNA 组。采用半定量 RT-PCR 及 Western blot 印迹法对 LX-2 细胞中 HMGA1、α-SMA 和 E-cad 的 mRNA 及蛋白表达水平进行检测，采 用 MTT 法对 LX-2 细胞增殖水平进行检测。 结果： 1. 半定量 RT-PCR 和 Western blot 印迹法检测 HMGA1 的表达：与正常对 照组、空白对照组、阴性对照组相比，3 个干扰组细胞 HMGA1 基因和蛋白表 达水平均明显降低(P﹤0.05)，其中干扰组 HMGA1-siRNA-1 的干扰效果最好（P ﹤0.01）。 2. 随着 TGF-β1 剂量加大，HMGA1 基因表达水平逐渐升高，各组间也有 显著差异(P﹤0.05)。 II 万方数据 摘要 3. TGF-β1 刺激组与 TGF-β1+NC-siRNA 组之间细胞增殖水平及 HMGA1、 α-SMA、E-cad 的基因及蛋白表达水平差异无统计学意义( P﹥0.05)，细胞增殖 水平及 HMGA1、α-SMA 表达均明显高于正常对照组(P﹤0.05)，E-cad 表达显著 低于正常对照组(P﹤0.05)，而 TGF-β1+ HMGA1 siRNA 组细胞增殖水平及 HMGA1、α-SMA 的基因及蛋白表达水平与 TGF-β1 刺激组及 TGF-β1+NC-siRNA 组相比均显著下降(P﹤0.05)，E-cad 表达水平显著增高(P﹤0.05)。 结论：