LY294002对骨肉瘤细胞生物学行为的影响和其机制的体外研究.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 探讨 PI3K 抑制剂 LY294002 对骨肉瘤细胞 U2OS 和 MG63 增殖、凋亡、侵 袭、迁移的影响及其作用的分子机制。 方法： 使用梯度浓度的 LY294002 对骨肉瘤细胞 U2OS 和 MG63 进行干预，MTT 检测细胞在不同时间（24、48 和 72 h）的增殖情况，并分别测得两细胞株处理 24h 后的半数抑制率时的药物浓度（IC50 值）；流式细胞术检测 U2OS 凋亡情 况。在低于 IC50 浓度的情况下，划痕愈合和 transwell 侵袭实验检测细胞迁移、 侵 袭 能 力 ； RT-PCR 和 Western blot 检 测 不 同 浓 度 的 LY294002 对 PI3K/AKT/FASN 信号通路的影响。 结果： ①与对照组相比，不同浓度的 LY294002(5、10、20、40、80、160 μM)对骨 肉瘤细胞 U2OS 和 MG63 增殖均有抑制作用，并且随着作用时间的延长，抑制 率升高。此外，测得处理 24h 后的 IC50 值，U2OS 细胞为 62.98 μM，MG63 细 胞为 55.2 μM。 ②与对照组相比，不同浓度的 LY294002（20、40、80、160 μM）均可促进 骨肉瘤细胞 U2OS 和 MG63 凋亡，且浓度越高，细胞凋亡率越高。 ③与对照组相比，不同浓度的 LY294002（20、40 μM）均可抑制骨肉瘤细 胞 U2OS 和 MG63 侵袭和转移，并且浓度越高其抑制作用越强。 ④LY294002 抑制 PI3K/AKT/FASN 信号通路中各蛋白的表达和 FASN 转录 水平（mRNA）的表达，并且随 LY294002 浓度的升高而呈现抑制增强趋势。 结论： LY294002 能抑制骨肉瘤细胞 U2OS 和 MG63 中 PI3K/AKT/FASN 信号通路， 从而有效地抑制细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭，并且存在剂量依赖性。为后 续的体内实验打下了一定的理论基础，也为骨肉瘤的治疗提供了新的参考。 关键词：LY294002；骨肉瘤；增殖；凋亡；侵袭；迁移。 II 万方数据 Abstract ABSTRACT Objective: Investigate the effect of LY294002 on the proliferation, apoptosis, migration and invasion in U2OS and MG63 cells, and its molecular mechanism. Methods: Review the related literatures about LY294002 and define the commonly used range of concentrations. Treat the U2OS and MG63 cells with the concentration gradient of LY294002, then use MTT method to assess the the effect on cell prol