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PAGE  PAGE 2 脂肪酸提取 Fatty Acid Extraction 准备：16*125mm一次性螺旋盖玻璃管 样品彻底混匀 每批次包含（30管）{blank（1）、control pools（2）、dliplicates（3）} 标注第一套16*125mm玻璃管 加100μl样品（血清serum）至管底部 加4.0ml甲醇 加2.0ml氯仿 加1.5ml水 加50μl内参 混匀，旋盖，旋转10s 室温静置15min 加2.0ml氯仿 加2.0ml水 盖上，涡旋 静置5min 离心样品，1500g（2750rpm）30min，16oC 去上清和白色固体层 二、标注第二套16*125mm玻璃管 1.将尽可能多的下层移至新的16*125mm玻管 2.N2 35 oC水浴吹干 3.加1.5ml BF3 （甲醇溶液14%）至每管 4.旋紧，混合，培养30分钟，90 oC，观察气泡 5.冷却10min 6.加4.0ml戊烷 7.加1.5ml水 8.旋上盖，涡旋10s 9.离心2min，2750rpm 三．第三套16*114mm锥形玻璃管 1.转移每管上层至新管 2.N2 35 oC水浴吹干 3.混悬，加400μl己烷、100μl庚烷，3h内 4.涡旋10s 5.可在冰箱储存几天，不要弄干 从每50μl混悬样品中取2μl做G-C。 四．G-C GC环境：柱sp2380 105m*0.53mm*0.20μm 恒温140 oC，,3min，8C/min to 220C, hold 12 min Injector/Detector 260C Relay 0 on at -0.25min Carrier gas 氦气 12 psi 程序操作： 正常开机，从左→右，打开空气泵，氢气发生器 打开钢瓶旋钮 打开GC 打开电脑online1界面，运行预热程序 打开文件夹，第一个程序双击即可 待电脑界面显示Ready，按机上“Start”键 约80mm后，运行：插入柱子 d/ ag：lent chem / method/ PUFA.M (第二个)双击，即可 操作界面： View/ Method and Run Control 实时监控 Sequence/ Sequence Table 用右下appliance line增加设定样品数 数据处理：online、offline中均可处理数据 第一个峰最高，是溶剂峰，要切掉 双击“offline”软件，打开 选择实验日期，即有相应结果出现 双击要处理的样品结果 Graphics/ signal options /use Rungs 设定时间范围 一般0~52min，即横坐标 /Auto Scale 设定峰高范围 根据实际调整如20~150，即纵坐标 调整整个峰图至合适位置 切峰：溶剂峰要切掉 Integration/带黄色的图标 Edit/Set Integration… 在尽量贴近峰的左、右位置各点一下，切掉溶剂峰，而后点第一个Integrate Current Chromatic…保存 切掉的峰横坐标方向没有红???，而计算面积的峰有 与标准品对比出峰时间点、峰形、area%来确定目的峰 计算所有ω-3的area%总和及所有ω-6的area%总和 计算出比例 点击print可输出PDF数据 File/ printer set up/ specific printer 选择Adobe PDF 确认后，点击峰图上方的print 图标，即可将PDF文件另存 用于计算的ω-3和ω-6 PUFA： ω-3：18：3 n 3，20：5 n 3，22：5 n 3，22：6 n 3 ω-6：18：2 n 6，20：4 n 6