含药血清对体外培养早期人膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞COX2mRNA表达影响.pdf

含药血清对体外培养早期人膝骨关节炎成纤维样滑膜细 胞 COX-2mRNA 表达的影响 中 文 摘 要 目的：本实验通过探讨含药血清对体外培养早期人膝骨关节炎成纤 维样滑膜细胞 COX-2mRNA 表达的影响,进一步阐释中药复方化瘀祛湿方 对早期膝 OA 治疗的作用机制，能相应地反映出中药复方化瘀祛湿方的 作用靶点, 以期为中药复方治疗膝骨关节炎提供可靠的实验理论基础。 方法： 选择成年健康新西兰大耳白兔 48 只,雌雄各半,予编号，按 随机数字表法抽取 24 只分成 4 组，每组 6 只：A 组（生理盐水组）、B 组（补肾活血组）、C 组（化瘀祛湿组）、D 组（塞来昔布组）。手术切断 膝关节前交叉韧带和内侧副韧带建立兔膝 OA 退行性变模型。造模成功 后 4 周[1]，开始喂药。按人和动物体表面积比计算动物等效给药量，确定 每天的剂量。生理盐水对照组灌以等量生理盐水。连续灌胃 7 天，均按 标准饲养环境自然喂养。在最后一次全天药量灌胃 90min 后，经乌拉坦 麻醉后取兔耳缘静脉穿刺采血，4℃过夜，2500r/min 离心 25min，取血清 0.22μm 滤膜抽滤、分装，56℃、30min 灭活、-20℃保存备用。将收集 的早期膝骨关节炎患者滑膜组织（根据 Kellgren 和 Lawrence 的 X 线诊断 标准：Ⅰ-Ⅱ级）12 例。经分离、纯化滑膜组织，原代成纤维样滑膜细胞 培养至四代的成纤维样滑膜细胞（FLS）用于实验，依次分别加入含生理 盐水的血清 DMEM 培养基，含补肾活血方含药血清的 DMEM 培养基， 含化瘀祛湿方含药血清的 DMEM 培养基，含塞来昔布含药血清的 DMEM 培养基，连续培养 24h[2]。重复离心后，-20℃冻存待测。应用实时荧光定 量（RT-PCR）检测四组含药血清干预后的早期膝骨关节炎患者成纤维样 滑膜细胞中的 COX-2mRNA 的表达水平。所得资料应用 SPSS18.0 统计软 件进行统计学分析，以α=0.05 作为检验标准。 3 结果：（1）所有的早期膝骨关节炎患者成??维样滑膜细胞经不同含 药血清干预后均能检测到 COX-2mRNA。（ 2）采用 2-ΔΔCt 进行相对表 达量分析，生理盐水组的 COX-2mRNA 表达水平最高,与塞来昔布组、化 瘀祛湿组及补肾活血组比较有明显差异(P＜0.05)。（ 3）含药血清组间比 较:化瘀祛湿组与塞来昔布组两组间的 COX-2mRNA 表达量比较差异无统 计学意义(P＞0.05)，而以上两组与补肾活血组比较差异均有统计学意义 (P＜0.05)。 结 论 ：（1）所有的早期（Ⅰ-Ⅱ级）膝骨关节炎患者成纤维样滑膜 细胞经不同含药血清干预后均能降低 COX-2mRNA 的表达水平。（2） COX-2mRNA 作为早期骨关节炎炎症途径的发生、发展过程中一个可能 潜在的启动因子，而早期使用中药复方化瘀祛湿方对早期膝 OA 患者成 纤维样滑膜细胞中 COX-2mRNA 的表达具有一定的抑制作用，有望作为 防治 KOA 的有效方法，值得进行更深一步的研究。 关键词：膝骨关节炎,成纤维样滑膜细胞,COX-2mRNA,含药血清,体外 培养 4 The drug serum that contained Huayu Qushi Dec- oction on the effects COX-2 mRNA expression in early human knee osteoarthritis synovial fibrobla-