新转基因动物-2012-资料.pptVIP

转基因动物 2012年12月 ;主要内容;随着现代高新科学技术的发展，现代实验动物学已从过去注重于动物饲养管理和实验操作的宏观向微观方向发展。 对小鼠基因组研究的目的不仅在于了解小鼠本身的基因结构，更主要的是为人类基因组研究、人类遗传疾病研究提供动物模型。 ;一、基本概念;转基因动物技术发展的四个阶段;二、命 名;(2) 方式—TgX 转基因符号通常冠以Tg字头。 随后的一个字母X，表示DNA插入的方式： H 代表同源重组； R 代表经过逆转录病毒载体感染的插入； N 代表非同源插入。 ;（3）插入片段标示—(YYYYYY) 是由研究者确定的表明插入基因显著特征的符号。 通常由放在圆括号内的字符组成：可以是字母（大写或小写），也可由字母与数字组合而成，不用斜体字，上下标、空格及标点等符号。;应注意以下几点： 1）标示应简短，一般不超过六个字符。 2）如果插入序列源于已经命名的基因，应尽量在插入标示中使用基因的标准命名或缩写，但基因符号中的连字符应省去。 3）插入片段标示只表示插入的序列，并不表明其插入的位置或表型。 ;一些标示的标准命名缩写： An 匿名序列； Ge 基因组； Im 插入突变； Nc 非编码序列； Rp 报告基因； Sn 合成序列； Et 增强子捕获装置； Pt 启动子捕获装置。 ;（4）实验室指定序号及实验室注册代号 实验室指定序号：是由实验室对已成功的转基因系给予的特定编号，最多不超过5位数字。而且，插入片段标示的字符与实验室指定序号的数字位数之和不能超过11。 实验室注册代号：是对从事转基因动物研究生产的实验室给予的特定符号。 ;2.举例 C57BL/6J-TgN(CD8Ge) 23 Jwg： 来源于美国杰克逊实验室（J）的C57BL/6品系小鼠被转入人的CD8基因组（Ge）；转基因在Jon W.Gordon (Jwg) 实验室完成，获取于一系列显微注射后得到的序号为23的小鼠。 转基因符号缩写: C57BL6J-TgN23Jwg ;TgN(GPDHIm)1Bir 以人的甘油磷酸脱氢酶基因（GPDH）插入（C57BL/6J X SJL/J）F1代雌鼠的受精卵中，并引起插入突变（Im），这是Edward H.Birkenmeier(Bir)实验室命名的第一只转基因小鼠。 根据转基因动物命名原则，如果转基因动物的遗传背景由不同近交系或远交群混合而成时，该转基因符号不使用动物品系或种群的名称。 缩写： TgN1Bir;三、遗传修饰动物模型的建立方法;导入基因的主要方式;（一）雄原核显微注射法;一、设计转基因构件 1、目的基因的获取 2、基因载体（复制子）的选择与构建 3、目的基因与载体的连接（连接酶）：重组DNA 分子 二、动物操作 1、准备假孕母鼠（养母） 2、受精卵的准备 3、基因导入 4、胚胎移植 5、对幼鼠的鉴定 ;转基因工作需要的动物;原核注射法制备转基因鼠技术路线;优点： 外源DNA大小基本不受限制（1-50kb）；导入过程直观； 整合率高 缺点： 设备昂贵、环节较多 对操作人员有较高的技术要求　 低效率（尤其是大家畜） 对卵子伤害大，胚胎存活率低 基因整合随机性 转基因沉默 ;（二）胚胎干细胞（ES细胞）法;优点： 外源基因整合情况的可控性高。 可预先在细胞水平检测外源基因的拷贝数、定位、表达的水平及插入的稳定性。 外源基因导入ES细胞的方法多样，细胞鉴定及筛选方便。 缺点： ES细胞系建立及培养困难 维持ES细胞的未分化及多向分化潜能不易 所得个体为嵌合体 ;（三）完全基因剔除转基因动物;基因剔除的技术路线;转基因动物技术使动物和人体基因工程研究从以往的单基因离体水平的操作，发展到了离体和在体相配合的、分子和细胞水平操作的，有动物整体水平产生效应的崭新阶段，它使得人们能从更完整的系统中去认识生物分子的作用，应用前景广阔。;转基因动物研究的意义和作用： 1、生命现象的基础研究。转基因动物是对多种生命现象本质深入了解的