紫外-可见光吸收实验.ppt

紫外-可见光吸收实验;1.实验目的;实验目的;实验原理;图1 电子能级与电子跃迁;2.紫外光谱的表示法 （1）紫外吸收带的强度 一定温度下，一定波长的单色光通过均匀的、非散射的溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。 朗伯-比尔定律（Lamber-Beer）：A＝kbc A：吸光度（描述溶液对光的吸收程度）； k：摩尔吸光系数，单位 L·mol-1·cm-1； b：液层厚度（光程长度），通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位 mol·L-1；;（2）紫外光谱的表示法 UV图由横坐标、纵坐标和吸收曲线组成。 横坐标表示吸收光的波长，用nm为单位。 纵坐标表示吸收光的吸收强度，可以用A（吸光度）、T（透射比或透光率或透过率）、1-T（吸收率）、k（吸收系数）中的任何一个来表示。 T = It / I0 吸收曲线表示化合物的紫外吸收情况。曲线最大吸收峰的横坐标为该吸收峰的位置，纵坐标为它的吸收强度。;（3）紫外-可见分光光度计的基本构造 基本构造主要由光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示系统五大部分组成。 ;Ⅰ 光源 在整个紫外光区或可见光区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。;Ⅱ 单色器 单色器是将光源辐射的复合光分成单色光的光学装置。它是分光光度计的心脏部分。单色器一般由狭缝、色散元件及透镜系统组成。关键是色散元件，最常见的色散元件是棱镜和光栅。 狭缝：将单色器的散射光切割成单色光。直接关系到仪器的分辨 率。狭缝越小，光的单色性越好。分为入射狭缝和出射狭缝。 棱镜：玻璃350～3200nm，石英185～4000nm。 光栅：波长范围宽，色散均匀，分辨性能好，使用方便。;Ⅲ 吸收池 又称比色皿，用于盛放待测溶液和决定透光液层厚度的器件。吸收材料必须能够透过所测光谱范围的光；一般可见光区使用玻璃吸收池，紫外光区使用石英吸收池； 规格有0.5、1.0、2.0、5.0cm等。 在高精度的分析测定中（紫外区尤其重要），吸收池要挑选配对，因为吸收池材料的本???吸光特性以及吸收池的光程长度的精度等对分析结果都有影响。 注意事项：手执两侧的毛面，盛放液体高度四分之三。;Ⅳ 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电管、光电倍增管、光电二极管、光电摄像管等。 要求灵敏度高、响应时间短、噪声水平低、稳定性好的优点。;Ⅴ 信号显示系统 将监测器输出的信号放大并显示出来的装置。常用的液晶数字指示窗口和计算控制显示。;（4）紫外-可见分光光度计的分类 Ⅰ 按仪器使用波长分类： ①真空紫外分光光度计（0.1-200 nm）； ②可见分光光度计（350-700 nm）； ③紫外-可见分光光度计（190-1100 nm）； ④紫外-可见-红外分光光度计（190-2500 nm）； Ⅱ 按仪器使用的光学系统分类： ①单光束分光光度计； ②双光束分光光度计； ③双波长分光光度计； ④动力学分光光度计；;单光束分光光度计;（5）紫外-可见分光光度计的应用 Ⅰ 推断官能团 如果一个化合物在紫外区有强的吸收，表明它可能存在共轭体系，吸收波长越长，共轭体系越大。 Ⅱ 判断异构体 不同的异构体可能具有不同的紫外光谱，以此来判断属哪个异构体。 Ⅲ 推断分子结构（骨架）（可结合Woodward规则的计算结果） Ⅳ 分子量的测定 Ⅴ 定量分析的应用：朗伯-比尔定律。 Ⅵ 医药研究 抗癌药物对 DNA 变性影响的研究、人血清与癌细胞关系的研究。;实验内容与步骤;式（2）中： A为样品吸光度； W为平均片重（g/片）； M为称样重量（g）； 标示量为0.75mg/片； E1%1cm为醋酸地塞米松（C24H31FO6）的吸收系数，按354计算。 ;实验报告要求;思考题;分组安排： ;谢 谢！