子宫角冲胚法.ppt

畜禽繁殖技术;学习目标; 1.概念 在供体配种或人工授精后适当时间，利用冲洗液把胚胎从供体生殖道冲出，收集在一定的器皿中，以便移植给受体的过程即为胚胎的采集，简称采胚。;2.采胚时间 根据配种时间、排卵的大致时间、胚胎运 行速度、胚胎的发育阶段、畜种、胚胎所处 的部位及采胚方法等因素来确定适宜的采胚 时间。 胚胎的采集一般在配种3～8天后，发育至4 ～8细胞以上为宜。; 采胚所用的冲洗液很多，一般多为组织培养液，如PBS、TCM-199，加入牛血清白蛋白或小牛血清，使用时温度应在35℃左右，并加入抗生素，以防生殖道感染。;3.采胚方法 目前胚胎的采集方法主要有三种，即离体生殖道回收法、手术采胚法和非手术采胚法。 实验动物多采用离体生殖道回收法； 绵羊、山羊、猪和其他中小动物多采用手术采胚法； 大家畜的胚胎多采用非手术法。; （1）离体生殖道回收法：主要用于小鼠。一般将老鼠用颈脱臼法处死，立即剖腹，无菌采取生殖器官，去除子宫和输卵管上附着的韧带和脂肪，用生理盐水将血液洗净。 小鼠的输卵管很细，若要回收进入子宫前的早期受精卵，可将输卵管直接放入含少量冲卵液的平皿中，用检卵针将输卵管膨大部剖开，来回拨动组织块，检出游离的卵子。; 回收进入子宫的胚胎时，先冲洗生殖器官，然后从子宫体内部将两侧子宫角分开，在宫管结合部剪去输卵管，将子宫角放入平皿，用冲卵液分别反复冲洗两侧子宫腔，收集冲卵液，放在实体显微镜下检卵。 ;（2）手术采胚法：多用于羊、猪、兔等动物， ①母畜保定：一种方法是用全身或后躯麻醉，母畜进行仰卧保定。另一种方法是用局部麻醉，使母畜站立于六柱栏中保定。二者的保定姿势均为前低后高的方式。; ②麻醉：全身麻醉可用普鲁卡因、酒精等；局部后躯麻醉用普鲁卡因、利多卡因进行腰荐或尾椎硬膜外腔注射，手术部位再以利多卡因作皮肤浸润麻醉。 ③手术部位：对于仰卧保定的母畜，母牛可在乳房至脐孔之间的白线上剖腹，切口长约10cm；羊在乳房左侧切口，便于将输卵管和子宫露出切口部位，切口长度4～6cm。; ④采胚：目前手术法采胚有以下3种方法。 输卵管冲胚法： 优点：冲卵液用量少、胚胎回收效率高且省时。 缺点：容易造成输卵管粘连。 子宫角冲胚法： 优点：对输卵管的损伤小。 缺点：胚胎回收率比输卵管采胚法少， 冲卵液用量多。 输卵管-子宫角冲胚法：能获得较高的采胚率。;（3）非手术法：牛、马可采用非手术法。 一般在配种过后7天进行。由于它比手术法简便易行而且伤害生殖道的危害性小，故有较大的优越性。; 非手术采胚法前先尾椎麻醉，然后将三通管插入子宫角内注入空气或水将三通管的气球充满，以堵塞子宫角基部。注意气球充盈度，避免对子宫内膜的过度压迫。用30～60ml冲洗液灌入，充满一个子宫角，再令其回流至集卵皿，同时隔着直肠轻轻按摩子宫，最好用手在直肠内将子宫角提起。这样多次重复冲洗，直至用完300～800ml冲洗液。然后用同样方法冲洗另一个子宫角。; 收集马的卵母细胞或胚胎，气球应放在子宫颈内充气，同时冲洗两个子宫角。牛、羊的胚胎用非手术法收集时，通常在配种后6～8天胚胎进入子宫角时进行，此法不能收集位于输卵管内的胚胎。 ;一、填空题 1.目前手术法采胚有3种方法，分别是输卵管冲胚法、子宫角冲胚法和输卵管-子宫角冲胚法。 2.手术采胚法保定时，采取是前低后高的方式。 3.目前胚胎的采集方法主要有三种，即离体生殖道回收法、手术采胚法和非手术采胚法。;课堂练习;三、问答题 1.什么是采胚？ 在供体配种或人工授精后适当时间，利用冲洗液把胚胎从供体生殖道冲出，收集在一定的器皿中，以便移植给受体的过程即为胚胎的采集，简称采胚。